Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 10

Идентификация выделенной культуры. Идентификация микробов –  определение систематического поло­жения выделенной из материала культуры до вида и варианта. Первым условием надежности идентификации является безусловная чистота культуры. Для идентификации микробов используют комплекс признаков: морфологические (форма, размеры, наличие жгутиков, капсулы, спор, взаим­ного расположения в мазке), тинкториальные (отношение к окраске по Граму или другим методам), химические (соотношение гуанина+цитозина в молекуле ДНК), культуральные (питательные потребности, условия куль­тивирования, темп и характер роста на различных питательных средах), ферментативные (расщепление различных веществ с образованием про­межуточных и конечных продуктов), серологические (антигенная структура, специфичность), биологические (вирулентность для животных, токсигенность, аллергенность, влияние антибиотиков и др.).

         Пробирки с посевами вынимают из термостата, изучают характер роста на скошенном агаре, убеждаются, что в пробирках получен рост одной культуры, отмечают характер налета по цвету, прозрачности.

         Рост на скошенном агаре может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным. Чтобы убедиться в чистоте культуры из  культуры готовят  мазок и окрашивают по Граму.

Для биохимической дифференциации изучают способность бактерий сбраживать углеводы с образованием промежуточных и конечных продуктов, способность разлагать белки и окислительно-восстановительные ферменты.

Для изучения сахаролитических ферментов выделенные культуры засевают в пробирки с полужидкими средами, содержащими лактозу, глюкозу. На полужидкие среды посев делают уколом в глубину среды. При посеве уколом пробирку со средой держат под наклоном, вынимают проб­ку, обжигают край пробирки. Материал забирают стерильной петлей и прокалывают ею столбик питательной среды почти до дна.

Для определения протеолитических ферментов выделенную культуру засевают на пептонную воду или МПБ. Для этого в руку берут про­бирку с посевом ближе к себе, а пробирку со средой - дальше от себя. Обе пробирки открывают одномоментно, захватив их пробки мизинцем и краем ладони, обжигают края пробирок, прокаленной охлажденной петлей захватывают немного культуры и переносят во вторую пробирку, растирают в жидкой среде на стенке пробирки и смывают ее средой.

При посевах и пересевах внимание должно быть обращено на соблюдение правил стерильности, для того, чтобы не загрязнять свои посевы посторонней микрофлорой, а также не загрязнять окружающую среду. Пробирки маркируют и помещают в термостат для инкубирования
на сутки.

Четвертый этап

          Учет результатов. Заключение по исследованию.

          Учитывают результаты идентификации и по совокупности полученных данных, опираясь на классификацию и характеристику типовых штаммов, описанных в руководстве (определитель Берджи, 1994-1996 гг.), определяют вид выделенных культур.

          Выполненная работа оформляется в виде протокола по схеме:

Протокол исследования материала (задача № ………)

1-й день. Посев материала на пластинчатый агар петлей параллельными штрихами. Посев в термостат на сутки.

2-й день. Исследование колоний и их характеристика.

Таблица 6. Характеристика роста исследуемых культур

Признаки колоний	колония 1	колония 2
Макроскопические: прозрачность размер форма характер поверхности цвет
Микроскопические: характер  края структура
Консистенция

Приготовление мазков из колоний, окраска по Граму

Колония 1

Колония 2

          Оставшуюся часть колонии пересевают на скошенный агар для выделения чистой культуры. Посевы на сутки в термостат при 37°С.

3-й день. Идентификация чистой культуры

          Характер роста на скошенном агаре

          Колония 1

          Колония 2

          Окраска по Граму, чистота культура

          Колония 1

          Колония 2

Посев культуры на среды с лактозой, глюкозой и МПБ. Посевы на сутки в термостат при 37°С.

4-й день. Учет результатов. Заключение по исследованию.

Таблица 7. Характеристика типовых штаммов, входящих в задачи.

Вид микробов	Ф о р м а	Окраска по Граму	К а п с у л а	Ж г у т и к и	С п о р а	Пестрый ряд
						Л а к т о з а	Г л ю к о з а	МПБ
								И н д о л	Се- ро- во- до- род
E. coli	пал	отр	-	+	-	КГ	КГ	+	-
S. aureus	кокк	пол	-	-	-	-	К	-	+
Kl. pneumoniae	пал	отр	+	-	-	КГ	КГ	-	-
B. cereus	пал	пол	-	+	+	-	К	-	+
Sarcina	кокк	пол	-	-	-	-	-	-	-
Таблица 8. Характеристика выделенных культур
Колония 1
Колония 2

Вид микроба колонии 1 ………………………………………………….

Вид микроба колонии 2 ………………………………………………….

Вывод: из исследуемого материала выделены культуры …………….

ЗАНЯТИЕ 8

ТЕМА: ФЕРМЕНТЫ. ФЕРМЕНТАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ БАКТЕРИЙ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ

План занятия

1.  Ферменты бактерий

2.  Изучение сахаролитических ферментов бактерий

3.  Изучение протеолитических ферментов бактерий

4.  Использование ферментативной активности бактерий для идентификации микроорганизмов

Цель занятия: Ознакомить студентов с характеристикой бактериальных ферментов, использованием их для идентификации возбудителя, а также в практической деятельности человека