В настоящее время чаще применяется твердофазная модификация ИФА , при этом АГ или АТ сорбируются в лунках полистироловых планшет. К твердой фазе присоед-ся АТ, кот при инкубации с пат мат-ом улавливают специфический АГ. К обр-ся иммунокомплексу прибавляются меченые пероксидазой АТ , специфические то ли к его АГ, то ли к его АТ, отсюда—иммунопероксидазный 3-ой комплекс, при добавлении к к-му ортофенилендиамина с Н2О2 как хромогенного субстрата д/пероксидазы происходит пожелтение. Рез-ты учитыв-ся спец-ым спектрофотометром
РИА—Д/его проведения АГ и АТ метят радиоактивными изотопами и в зав-ти от метода и целей те или другие сорбируются на тв. носителе . При конкурентном РИА на пов-ти полистироловых лунок сорбируются АТ, а к ним добавляется исследуемый мат-ал, сод-щий специфич. АГ. После обр-я иммунного комплекса добавляют меченый АГ, обладающий той же специфичностью к иммобилизированным в лунках АТ. Этот АГ будет реаг-ть только с той частью активных центров иммобилизированных АТ, кот-е остались незаблокированными АГ исследуемого материала.
24. В основе реакции лизиса лежит способность клеток (эритроц-ов, бактерий) лизироваться при взаимодействии с антисывороткой в присутствии комплемента. Чаще используются реакции гемолиза, реже бактеролиза (главным образом при дифференцировке холерных и холероподобных вибрионов).
Реакция гемолиза Под влиянием АТ и комплемента мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную жидкость в следствии выхода гемоглобина. Реакция широко применяется в кач-ве показателя адсорбции комплемента при постановке диагностической РСК. Д/реак-и гемолиза исп-ют эритроциты барана (АГ), гемолитическую сыворотку ( из гипериммунизированных тем же АГ кроликов) и комплемент—сыворотка криви морской свинки. Реакцию гемолиза используют д/опред-я кол-ва комплемента в сыворотке крови людей и см выше
Реакция связывания комплемента (РСК)-- сложная 2-хэтапная серологическая реакция. В ней используют 5 ингредиентов, составляющих 2 системы: 1) АГ; АТ; комплемент; 2) эритроциты барана, сесибилизированные гемолитической сывороткой, содержащей специф-е к ним АТ. При этом взаимодействии АГ с АТ на первом этапе реакции приводит к образованию иммунного комплекса, кот-й адсорбирует комплемент, но визуально обнаружить это невозможно. В кач-ве индикатора фиксации комплемента на комплексе АГ-АТ на втором этапе используют гемосистему, кот-я , являясь иммунным комплексом, тоже способна связывать его. Возможны 2 рез-та реакции: гемолиз при несоответствии АГ АТ иотсутствие лизиса эритроцитов при соответствии АТ и АГ
РСК может быть использована д/выявления специфических АТ по известному АГ или наоборот
Ингредиенты:
1. Исследуемая сыворотка накануне прогревается при 56С 30 мин д/инактивации её собственного комплемента и разводиться 1:5
2. АГ могут быть культуры убитых бактерий, их лизаты, экстракты бактерий, пат измененных и нормальных органов, тканевые липиды, вирусы
3. Комплемент—сыворотка морских свинок, полученная в день опытов
4. Гемолитическая система состоит из смешанных в равных объемах гемолитической сыворотки в 3-ом титре и 3% взвеси бараньих эритроцитов по осадку. Д/сенсибилизации эритроцитов гемолизинами смесь выдерживают в термостате при 37С 30 мин
Титрование компонентов РСК: комплемент титруют, т.к. кол-во его у каждой морской свинки разное; титрование АГ—АГ, используемые в РСК, могут адсорбировать какое-то кол-во комплемента (комплементарные св-ва), титром АГ считается его наименьшая доза, при которой наступает полный гемолиз (в РСК используют рабочую дозу АГ, составляющую примерно 1/2-1/3- титра).
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.