Д/постановки РА необходимы 3 компонента: АГ( агглютиноген);АТ( Агглютинин) и элек-лит (0,85% NaCl). В кач-ве АГ в РА применяют 18-24ч взвеси живых или убитых формалином, спиртом или прогреванием бактерии. Наиболее стабильными явл-ся диагностикумы. Д/приготовления АГ исп-ют культуру м/о только в S-форме. Д/получения агглютинирующих сывороток обычно гипериммунизируют кроликов, при этом 5-7 раз подкожно, а затем внутривенно с интервалами 2-7 суток им вводят в возрастающих дозах взвесь убитых, а в конце(2-3 раза) живых бактерий. Ч/з неделю после иммунизации определяют титр сыворотки¸если он недостаточен, то иммунизацию продолжают. Полученные таким образом сыворотки—неадсорбированные¸ ибо содержат групповые агглютинины и могут в небольших разведениях склеивать родственные в АГ-ом отношении бактерии. Поэтому д/определения вида бактерийнадо ставить развернуткю реакцию с сывороткой, разведенной от 1:100 до ее титра. Более достоверные рез-ты при определении вида или серовата бактерий дают адсорбированные сыворотки, которые не имеют групповых агглютининов. Выделяют последовательность РА:
Ориентировочную РА выполняют перед постановкой развернутой реакции д/того, дабы получить предварительное представление о выделенном виде или серовате бактерий, отбрать положительно реаг-ие с ними колонии и исключить из дальнейших исследований неагглютинирующиеся
Развернутая РА д/идентификации бактерий
РА д/серологической диагностики инфекционных болезней позволяет обнаружить в сыворотке больных АТ к опред-ым видам пат. м/о . Их наличие в орг-ме взможно лишь при нахождении в нем возбудителя, след-но АТ—косвенный показатель природы заболевания¸ а сам способ подтверждения д-за по титру АТ наз-ся серодиагностикой
20. РПГА ставиться д/обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы кот-ых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается, или же д/выявления АТ в сыворотках больных к этим высокодисперсным вещ-ам и мельчайшим м/о
РПГА д/серодиагностики инфекционных болезней Используя РПГА д/обнаружения АТ в сыворотках больных, готовят эритроцитарные АГ-ые диагностикумы . Д/этого эритроциты 15 мин обрабатывают раст-ром танина в разведении 1:20000- 1: 200000 , что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность. Затем их смешивают с известным АГ и инкубируют 2ч при 37С . Сенсибилизированные АГ эритроциты 2-3 раза отмывают 0.85% раствором NaCl и в кол-ве 0.10-0.25 мл 0.5% взвеси добавляют к сыворотке, разведенной от1:10-1:1280 и разлитой по 0.3 мл в лунки плексигласовых досок. Котролем служат взвеси интактных и нагруженных АГ эритроцитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции. Результаты учитывают ч/з 2ч поле инкубации в термостате: Эритроциты могут располагаться в виде зонтика с неровными краями; зонтика, в центре которого кольцо из несклеивающихся эритроцитов; в основном несклеивающиеся эритороциты и в виде пуговицы. В серодиагностике РПГА по чувствительности и наглядности превосходит развернутую РА
РПГА д/выявления высокодисперсных АГ готовят двукратные разведения АГ в объеме 0.25-0.5 мл, к каждому из них добавляют 0.2 мл эритроцитов, сенсибилизированных АТ известной иммунной сыворотки. Результаты РПГА учитывают ч/з 2ч после инкубации в термостате.
Антительная реакция гемагглютинации в диагностике инфекционных АГ применяется ограниченно, но она может быть использована в ранние периоды заболевания, вызванных сольманеллами, шигеллами, вибрионами, д/определения О-АГ возбудителей в сыворотке крови больных
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.