21. Реакцией преципитации (РП) называется осаждение из раст-ра АГ при воздействии на него иммунной сыворотки и элек-лита. Посредством РП можно выявить АГ в разведениях 1: 100000, т.е. в кол-вах не обнаруживаемых хим-им путем. Приципитиногены (АГ) – ультрамикроскопические частицы белково-полисахаридной природы: пат-ий мат-ал, прод-ты распада и лизиса м/о и др. ПГ обладают термоустойчивостью, поэтому д/их получения мат-ал кипятят. Преципитирующие сыворотки получают путем гипериммунизации кроликов циклами в теч-ии неск-их месяцев, вводя им бактериальные взвеси, фильтраты бульонных культур, аутолизаты, солевые экстракты м/о, сывороточные белки. Титр преципитирующей сыворотки в отличии от титра др диагностич-их сывороток опред-ся мах разведением АГ, кот-ый преципитируется данной сывороткой. Это объясняется тем, что преципитиноген , уч-ий в РП, содержит в ед объёма гораздо больше частиц, чем АТ в преципитирующей сыворотке такого же объема, поэтому преципитирующие сыворотки выпускают с титром не ниже 1: 100000. РП широко применяется не только в диагностике инф-ых болезней, но и в судебной мед-не—в целях опред-я видовой принадлежности белка (кровяных пятен и др). недостатком РП явл-ся нестойкость преципитата, кроме того с её пом-щью нельзя определить кол-ый состав АГ, участвующих в формировании преципитата.
Реакция преципитации в геле (РПГ) широко исп-ся в диагностике болезней, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.
Метод иммуноэлекторофореза. С пом-ю этого метода можно сделать более тонкий анализ АГ структуры бак-ий, идентифицировать отдельные АГ в многокомпонентной системе. В основе метода—электрофорез АГ в геле с послед-ей их пеципитацией иммунной сывороткой.
Реак-я нейтрализации (РН) токсина антитоксином. Веё основе—способность специфической антитоксич-ой сыворотки нейтрализовать экзотоксин, при этом в пробирках наблюд-ся помутнение смеси. Этот феномен флоккуляции исп-ся д/определения силы дейсвия антитоксических сывороток.
22. РИФ—2 метода постановки:
· Прямая РИФ—простая реак-я , но д/её постановки требуется большое кол-во меченых антимикробных сывороток
· Непрямая РИФ—более сложная, но при её постановке обходятся одной меченой сывороткой. При этом вначале АГ связывают немеченой специфической сывороткой, а затем образованный иммунный комплекс АГ-АТ дополнительно обрабатывают меченой ФИТЦ антисывороткой, сод-щей АТ против Ig этого комплекса. Обычно индикация АГ (микроба) на первом этапе проводиться иммунной кроличьей сывороткой, тогда на втором этапе исп-ся меченая ФИТЦ антикроличья сыворотка, полученная путем иммунизации гама-глобулинами кролика, ослов и других козлов (они же животные)
При прямой РИФ интенсивность специфической флюоресценции бак-ых кл-ок оценивают по 4-хплюсовой шкале, обязательны 3 контроля обработки флюоресцирующими АТ суспензии: 1) гомологичных бак-ий (+ контроль); 2) гетерологичной культуры (-); 3) незараженного мат-ла (-)
23. ИФА—основан на обнаружении иммунного комплекса, один из компонентов к-го (АГ/АТ) мечен ферментом, способным разлагать субстрат (хромоген) с обр-ем окрашенных прод-ов
Постановка: предметные стекла с зараженной культурой кл-ок промывают, фиксируют в метеноле 10-20 мин и сушат. Затем на препарат наносят 1-2 кап меченого Ig , переносят во влажную камеру и держат при 37С 30 мин. Мозок промывают 0.85% NaCl , наслаивают на него неск-ко кап хромогенного субстрата и держат во влажной камере ещё 1 ч, затем промыв-ют aqua destillata и сушат. Д/контроля гомологичный АГ обрабатывают меченым нормальным гама-глобулином, а гетерологичный—меченым АТ . рез-ты учитыв-ся визуально в микроскопе с пом-ю спектрофотометра.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.