Методические указания по учебно-исследовательской работе студентов (УИРС), страница 9

,  где

   ФТАз - величина формольно-титруемого азота, полученная по методике Зеренса;

    ФТАч - величина  формольно-титруемого  азота, полученная по методике Черногорцева.

    Оборудование и реактивы:

    1) колбы конические объемом 200 мл;

    2) термостат;

    3) раствор исследуемого белка;

    4) воронки стеклянные;

    5) фильтры бумажные;

    6) баня водяная;

    7) раствор фермента;

    8) пипетки градуированные объемом 1 и 10 мл;

    9) 0,1N раствор NaOH;

   10) индикатор с pH перехода около 7;

   11) индикатор с pH перехода около 9;

   12) бюретка для титрования;

   13) раствор формальдегида, 40% нейтрализованный;

   14) цилиндр мерный объемом 10 мл.

   15) 5% раствор ТХУ.

Ход работы

     В коническую колбу вносят 100 мл раствора белкового субстрата 10 мл раствора фермента и направляют на термостатирование при 45⁰С  в  течение  60 мин.  После окончания термостатирования содержимое колбы делят на две части и направляют на определение азота формольно-титруемых аминогрупп по Черогорцеву и по Зеренсу.

Определение азота формольно-титруемых аминогрупп по  Черногорцеву.

     Перед определением ФТА по Черногорцеву содержимое колбы прогревают на кипящей водяной бане в течение 10 минут, фильтруют через бумажный фильтр, охлаждают и направляют на дальнейшее определение.

     В первую  коническую колбу объемом 200 мл вносят 10 мл полученного фильтрата, индикатор с pH перехода около 7 и титруют 0,1 N раствором едкой щелочи до  изменения окраски раствора.

     Во вторую  колбу  вносят 10 мл 40%  нейтрализованного раствора формалина с pH перехода около 9 и титруют 0,1N раствором едкой щелочи.

     В третью  коническую колбу объемом 200 мл вносят 10 мл полученного фильтрата, 10 мл 40%  нейтрализованного раствора формалина, индикатор с pH перехода около 9 и титруют 0,1N раствором едкой щелочи до изменения окраски раствора.

     Содержание азота формольно-титруемых аминогрупп (ФТА)  в  мг/100  мл  раствора белкового субстрата вычисляют по формуле:

, где

А - количество 0,1N раствора едкого натрия, пошедшего на титрование колбы №3 , мл;

B - количество 0,1N раствора едкого натрия, пошедшего на титрование колбы №2 , мл;

С - количество 0,1N раствора едкого натрия, пошедшего на титрование колбы №1 , мл;

К - коэффициент пересчета для 0,1N раствора едкого натрия;

C - количество азота,  эквивалентное 1 мл 0,1N раствора щелочи (1,4 мг азота на  1 мл раствора щелочи);

V₁ - общий объем гидролизата;

V - объем фильтрата, взятый на титрование;

V₂ - объем раствора белкового субстрата, взятый на исследование.

Определение азота формольно-титруемых аминогрупп по Зеренсу.

     В коническую колбу вносят гидролизат и равное количество 5% раствора ТХУ. Оставляют на 10 минут при комнатной температуре,  а затем фильтруют  через  бумажный фильтр и направляют на дальнейшее определение.

     В первую  коническую колбу объемом 200 мл вносят 10 мл полученного фильтрата, индикатор с pH перехода около 7 и титруют 0,1 N раствором едкой щелочи до  изменения окраски раствора.

     Во вторую колбу вносят 10 мл 40%  нейтрализованного раствора формалина  с  pH перехода около 9 и титруют 0,1N раствором едкой щелочи.

     В третью  коническую колбу объемом 200 мл вносят 10 мл полученного фильтрата, 10 мл 40%  нейтрализованного раствора формалина, индикатор с pH перехода около 9 и титруют 0,1N раствором едкой щелочи до изменения окраски раствора.

    Содержание формольно-титруемого азота (ФТАз) в мг/100мл белкового раствора вычисляют по формуле: