Методические указания по учебно-исследовательской работе студентов (УИРС), страница 4

 

…    N        CH     C        NH      CH      C        N    …

		R1		R2
	Енольная форма полипептида

 

                             C        N         CH      C        N   

5.2. ИССЛЕДОВАНИЕ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА БЕЛКА

     Общее представление о качественном аминокислотном составе белка можно  составить по  цветным  реакциям  с раствором исследуемого белка.  Однако  некоторые из  цветных реакций применимы только к свободным аминокислотам, либо к белковым гидролизатам.

5.2.1. Ксантопротеиновая реакция

(реакция на тирозин, триптофан, фенилаланин).

    В результате реакции раствора белка с концентрированной азотной кислотой выпадает осадок,  который при нагревании частично растворяется с образованием желто окрашенного  раствора.  Эта  реакция  указывает на присутствие в белке ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина, триптофана) и основана на образовании  нитропроизводных этих аминокислот.

    Оборудование и реактивы:

1) раствор исследуемого белка;

2) пробирки химические;

3) капельницы химические;

4) водяная баня;

5) кислота азотная концентрированная;

6) раствор едкого натра 33%-ный;

7) зажим для пробирок;

8) пипетки объемом 1 мл.

Ход работы

    К 5 каплям раствора белка добавить 3 капли концентрированной азотной кислоты и (осторожно!) нагреть на кипящей водяной бане. Жидкость окрашивается в желтый цвет. Интенсивность окраски зависит от количества  ароматических  кислот  в  исследуемом белке и варьирует от бледно-желтого до лимонно-желтого цвета.  Пробирку охлаждают, после этого в нее осторожно добавляют 10 капель 33% раствора NaOH. Окраска раствора переходит в оранжевую.  Если белок содержит незначительные количества  ароматических аминокислот, окрашивания не происходит.