Методические указания по учебно-исследовательской работе студентов (УИРС), страница 5

5.2.2. Реакция Миллона (реакция на тирозин).

    При добавлении  к раствору белка реактива Миллона,  содержащего азотную и азотистую закисную ртуть,  образуется вначале белый осадок,  который  при  нагревании приобретает красно-коричневый цвет. Реакция обусловлена наличием в белке тирозина, имеющего  фенольное  ядро,  которое при взаимодействии с реактивом Миллона образует окрашенную ртутную соль нитропроизводного тирозина.  Реакцию Миллона дают все белки,  за исключением тех,  молекулы которых содержат тирозин в незначительных количествах.

    Оборудование и реактивы:

    1) раствор исследуемого белка;

    2) пробирки химические;

    3) капельницы химические;

    4) спиртовка;

    5) реактив Миллона;

    6) зажим для пробирок.

Ход работы

    К 10 каплям раствора белка добавить 2-3 капли  реактива  Миллона  и  осторожно нагреть. Если в пробирке находится белок, содержащий значительное количество тирозина, то осадок белка приобретает красно-коричневый цвет, если белок содержит незначительные количества тирозина, то жидкость в пробирке остается бесцветной.

5.2.3. Реакция Адамкевича (реакция на триптофан)

     При добавлении к раствору белка незначительных количеств глиоксиловой кислоты в присутствии концентрированной серной кислоты получается красно-фиолетовое окрашивание.  Эта реакция основана на способности триптофана в кислой среде  вступать  в реакцию с альдегидами,  образуя при этом окрашенные продукты. Глиоксиловая кислота (НОС-СООН) всегда в небольших количествах присутствует в ледяной уксусной кислоте, поэтому последнюю используют как источник глиоксиловой кислоты.

    Оборудование и реактивы:

    1) раствор исследуемого белка;

    2) пробирки химические;

    3) капельницы химические;

    4) кислота уксусная ледяная или 1%-ный  раствор глиоксиловой кислоты;

    5) кислота серная концентрированная;

    6) зажим для пробирок.

Ход работы

    В пробирку наливают 5 капель раствора белка и 5 капель ледяной уксусной кислоты. Раствор слегка подогревают,  затем охлаждают и по стенке  пробирки  осторожно, чтобы жидкости не смешивались, наслаивают 10 капель концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев после некоторого отстаивания наблюдается красно-фиолетовое окрашивание в виде кольца, если белок содержит значительные количества триптофана. Если белок содержит незначительное количество  триптофана,  окрашивания  не происходит.

  5.2.4. Реакция с w-оксиметилфурфуролом  (реакция на триптофан)

     Окраска появляется вследствие реакции триптофана с оксиметилфурфуролом, образующимся при действии концентрированной серной кислоты на сахарозу.

    Оборудование и реактивы:

    1) раствор исследуемого белка;

    2) пробирки химические;

    3) капельницы химические;

    4) кислота серная концентрированная;

    5) зажим для пробирок;

    6) раствор сахарозы 10%-ный.

Ход работы

      1 мл  раствора белка смешать с 10 каплями 10%-ного раствора сахарозы и осторожно добавить 10 капель концентрированной серной кислоты.  На месте соприкосновения двух слоев появляется вишнево-красное окрашивание.

5.2.5. Реакция Фоля (реакция на серусодержащие аминокислоты)

     При добавлении к раствору белка едкой щелочи,  уксуснокислого свинца и последующем кипячении раствор начинает темнеть. Реакция обусловлена присутствием в белке серусодержащих аминокислот: цистина и метионина. Эти аминокислоты при нагревании в присутствии едкой щелочи разрушаются образуя сернистый натрий,  из которого образуется сернокислый свинец, выпадающий в виде черного осадка.

    Оборудование и реактивы:

    1) раствор фермента;