Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 3

захватывают и переваривают                                                                                   

частицы                                                                                                                       

                                                       Локализация и            Захват и переваривание

                                                       уничтожение              микробов                        

Макрофаги      подвижные          микробов в очаге

                      фиксированные      воспаления                  Участие в синтезе          

Микрофаги                                                                         иммуноглобулинов

 

Уничтожение   Уничтожение   Участие в синтезе                                                 

отживших         микробов и       иммуноглобулинов

элементов

организма 

Схема 4

Факторы неспецифической резистентности:

ГУМОРАЛЬНЫЕ

 

Комплемент     Нормальные антитела  Пропердин   Лизоцим     Лейкины

С1, С2, …С9     (иимуноглобулины)                                               Бета-лизины

                                                                                                          Эритрины и др.

 

Участвует в       Участвуют в фагоцитозе                Растворяет   Бактерицидное 

фагоцитозе          (опсонизация)                                грамполо-         действие

(хемотакси-                                                                 жительные                            

    ческое                                                                      бактерии                                    

 действие,                                              Бактерицидное                                                

опсонизация                                      действие совместно           Белки острой                                 

   цитолиз,                                            с комплементом         фазы воспаления                                       

 анафилак-             Совместно вызывают                                                       

  тоидное                      иммунный лизис,                                                                                 

 действие                бактерицидный эффект 

Методические   указания к демонстрации

1. Действие  лизоцима на М. lysodeiсticus.

Из яичного белка приготовлены разведения 1:25,  1:50,  1:100, 1:200 и разлиты по 0,5 мл в стерильные пробирки, пятая пробирка служит контролем, в нее налито 0,5 мл физиологического раствора. Затем в каждую пробирку долито по 0,5 мл взвеси культуры микрококка (стандарт 1 млрд/мл), пробирки ставят в термостат для инкубирования на 1 час. После чего пробирки рассматривают   и отмечают степень растворения микробов плюсами по четырехбальной системе:

++++ - полное растворение бактерий, жидкость прозрачная

+++   - незначительный осадок или легкая опалесценция

++     - осадок более выражен, растворено примерно 50% клеток

+       - значительный осадок, растворено примерно 25% клеток

-        - значительный осадок, жидкость такой же мутности, как в контроле

Результаты опыта записать по схеме:

Разведения яичного белка	1:50	1:100	1:200	1:400	Контроль
Степень действия лизоцима	++++	++++	+++	++	-

Вывод: титр лизоцима яичного белка 1:400

2. Определение гемолитической активности комплемента по 50% гемолизу.

Определение комплемента в исследуемой сыворотке основано на его способности вызывать гемолиз сенсибилизированных  эритроцитов (реакция иммунного гемолиза). Активность комплемента выражается в гемолитических единицах. За одну гемолитическую единицу комплемента принимают такое его количество, которое вызывает гемолиз 50% 0,5 мл стандартной взвеси сенсибилизированных эритроцитов при 37°С за 45 мин. Эта единица условная, она зависит от концентрации бараньих эритроцитов, количества антител, ионной силы системы. Для постановки опыта готовят буферный раствор, разводят исследуемую сыворотку, разливают ее в две пробирки по 0,1 и 0,25 мл, туда же доливают буферный раствор, доводя объем до 1,5 мл. В каждую пробирку вносят по 1,5 мл гемолитической системы, состоящей из равного объема гемолитической системы, состоящей из равного объема гемолитической сыворотки и 3% взвеси бараньих эритроцитов. Пробирки встряхивают и инкубируют 45 мин при 37°С, затем охлаждают в рефрижераторе при 2-4°С 18-19 часов. На следующий день проводят фотометрирование надосадочной жидкости из каждой пробирки и по калибровочной кривой определяют гемолитическую единицу комплемента. Калибровочную кривую строят по гемолизу стандартной взвеси эритроцитов.

         В сыворотке здоровых людей содержится 40-80 гемолитических единиц комплемента. Уровень комплемента у женщин ниже, чем у мужчин.

3. Демонстрация постановки фагоцитарного опыта.

Для постановки опыта берут свежую цитратную кровь и наливают 0,5 мл в стерильную пробирку, туда же добавляют 0,5 мл суточной бульонной культуры стафилококка. Пробирку встряхивают и помещают в термостат на 30 мин при 37°С, после чего из смеси гото­вят мазок. Мазок готовят на чистых обезжиренных предметных стеклах. Пастеровской пипеткой забирают верхний слой клеток над эритроцита­ми, каплю помещают на край предметного стекла, вторым шлифованным предметным стеклом, держа его под углом 45°, быстро проводят по стеклу, распределяя мазок равномерно. Мазок сушат на воздухе, фикси­руют смесью Никифорова 10 мин, окрашивают щелочной метиленовой си­нью 30 секунд, промывают водой, обсушивают и микроскопируют. Мазки просматривают   под микроскопом с иммерсионной системой, считают лейкоциты, как с фагоцитированными стафилококками, так и свободные от них. Подсчитывают не менее 100 клеток. После подсчета проводят расчет показателей фагоцитоза: фагоцитарного индекса (фагоцитарная активность) и фагоцитарного числа (фагоцитарная интенсивность) и др.