Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 23

используется как носитель)            получения        конструирования                                                          

                

                                                Антиген в виде     Полусинтетические

                                                молекулы или       Синтетические

                                                детерминанты       (антиген в молеку-

                                                Биосинтез              лярной форме –

                                                Химический         носитель-адьювант) 

                                                синтез (пептиды

                                                против вируса СПИДа)

                                                Генноинженерные

                                                (вакцина гепатита В-

                                                в дрожжи встроен

                                                HBs-антиген)    

 Анатоксины и химические вакцины готовят в адсорбированном виде, используя в качестве адсорбента гидроокись алюминия. Такие препараты обеспечивают выраженный иммунологический эффект за счет создания в месте инъекции так называемого депо вакцины и замедленной всасываемости ее.

Во вторую группу входят препараты, применяемые для создания  пассивного иммунитета – иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Иммунные сыворотки применяются для создания антимикробного, антитоксического пассивного иммунитета.

Антитоксические сыворотки получают путем гипериммунизации лошадей. Они подвергаются очистке от балластных белков методом ферментативного гидролиза и последующего диализа. Антитоксические  сыворотки дозируются в ME. За одну международную единицу прини­мают наименьшее количество сыворотки, нейтрализующее определенную дозу     токсина для животных определенного веса и вида в течение определенного времени.

Для создания пассивного антимикробного и антивирусного иммунитета применяют иммуноглобулины, получаемые путем осаждения глобулиновой фракции спиртом на холоду. Сырьем для получения иммуноглобулина служит антимикробная или антивирусная сыворотка, полученная путем гипериммунизации лошадей – гетерогенный иммуно­глобулин. Из крови иммунизированных доноров или переболевших людей получают гомогенный иммуноглобулин. Эти препараты применяют для экстренной профилактики или лечения  соответствующих инфекцион­ных заболеваний.

Многочисленную группу представляют препараты, используемые в диагностике инфекционных заболеваний.

Особую группу препаратов составляют фаги, способные разру­шать в организме соответствующие патогенные микробы.

Отдельную группу составляют препараты, приготовленные из живых микроорганизмов, представителей нормальной микрофлоры человека и обладающие выраженными антагонистическими свойствами. Эти препараты применя­ют с лечебной целью.

В последние годы выделена еще одна группа биологических препаратов – иммуномодуляторов, которые влияют на развитие иммунного ответа организмом. Использование таких препаратов позволит решить проблему иммунодефицитов, аутоиммунных заболеваний, рака.

При изучении препаратов студент обращает внимание на :

1.  Внешний вид препарата

2.  Из инструкции записывает, что содержит препарат, как он получен

3.  Какое биологическое действие на организм оказывает

4.  С какой целью препарат в организм вводится

5.  Как препарат вводится в организм

6.  Перечень обязательных сведений, которые указаны на этикетке:

·  наименование препарата

·  номер государственного контроля       

·  номер серии препарата

·  срок годности

·  срок вакцинации и ревакцинации         

Биологические препарат представляют собой вид продукции к производству и контролю, которой предъявляются особо жесткие требования. Эти требования обеспечивают безвредность, надежность и стандартность препарата для прививаемых.

Контроль препаратов осуществляется на всех этапах производства, кроме того, проводится полный дополнительный контроль в специальном подразделении - отделе биологического контроля, после заключения, которого препараты выпускаются для практического применения.

ЗАНЯТИЕ 32

ТЕМА: ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Цель занятия: Ознакомить студентов с понятием «полимеразная цепная реакция», изучить механизм проведения исследований с использованием полимеразной цепной реакции.

План занятия

1.  Понятие «полимеразная цепная реакция» (ПЦР).

2.  Метод ПЦР в диагностике возбудителей инфекционных заболеваний.

Полимеразная цепная реакция разработана K.Mullis, американским биохимиком в 1985 году. За это открытие ученый удостоен в 1993 году Нобелевской премии.

ПЦР – применяется для диагностики практически всех патогенных внутриклеточных, мембранных и других микроорганизмов, находящихся в различном биологическом состоянии, на разных стадиях развития патологического процесса. С помощью ПЦР возможно исследовать антибиотикорезистентность медленнорастущих и труднокультивируемых микроорганизмов. В качестве материала исследования можно исследовать любые биологические жидкости, клетки, ткани, объекты окружающей среды, причем содержащие не только свежие образцы ДНК или РНК, но и парафинизированные, формалинизированные срезы, высушенные и мумифицированные ткани, содержащие фрагментированную ДНК.

Материал исследования – соскобы эпителиальных тканей, кровь, сыворотку, плевральную или спинномозговую жидкость, мочу, слизь и другой  - берут в стерильные пробирки. Взятые пробы могут храниться в холодильных камерах при температуре -16-20°С не более 2-х недель.

ПЦР представляет собой многократно повторяющиеся циклы синтеза (амплификацию), заведомо выбранного исследователем из известной нуклеотидной последовательности определенного фрагмента ДНК-мишени, который является маркерным, т.е. уникальным для данного вида возбудителя. Этот процесс осуществляется в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы (Taq ДНК-полимераза, выделенная из бактерий Thermusaquaticus), дезоксинуклеозидтрифосфатов (дНТФ) и олигонуклеотидных затравок-праймеров. Механизм копирования специфической нуклеотидной последовательности ДНК-мишени не может начинаться в любой точке последовательности ДНК, только в определенных стартовых блоках – коротких двунитевых участках. Так, химические синтезированные, олигонуклеотидные затравки-праймеры и используются для создания стартовых блоков в заданных участках ДНК-мишени. Праймеры комплементарны последовательностям на левой и правой границах специфического фрагмента и ориентированы таким образом, что синтез ДНК, осуществляемый ДНК-полимеразой, протекает только между ними. В результате происходит увеличение копий специфического фрагмента по формуле 2n, где n – число циклов амплификации (увеличения). Обычно размер фрагмента составляет несколько сотен нуклеозидных пар.