Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 24

Каждый цикл синтеза специфических областей ДНК-мишени – амплификация – состоит из трех стадий:

1.  Денатурация. При 94°С происходит разделение цепей ДНК.

2.  Ренатурация. При 57-62°С происходит присоединение (отжиг) праймеров к гомологичным последовательностям на ДНК-мишени.

3.  Синтез. При 72°С происходит синтез новых цепей ДНК путем удлинения праймера в направлении 5/-3/.

Каждый цикл, обычно, длится 3-5 минут. В каждом цикле происходит удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 35 циклов наработать фрагмент ДНК, ограниченный парой выбранных праймеров, в количестве, достаточном для его исследования с помощью электрофореза.

Схема 19

   Цикл процесса амплификации фрагмента ДНК возбудителя в ПЦР

 


1 – стадия денатурации; 2 – стадия ренатурации; 3 – стадия синтеза.

Схема 20

Второй и следующие циклы амплификации

фрагмента ДНК возбудителя в ПЦР

 


         Преимущества ПЦР-диагностики:

·  Выявление специфического участка ДНК микроорганизма дает возможность заключения о присутствии возбудителя инфекционного процесса в исследуемом материале.

·  С помощью ПЦР возможно выявление даже единичных клеток возбудителя инфекционного процесса, независимо от его принадлежности к внутриклеточным, внеклеточным или другим видам инфекции. Поэтому же количество исследуемого материала, необходимого для проведения исследования, мало и может составлять несколько десятков микролитров.

·  ПЦР является высокоспецифичной, так как из исследуемого материала выделяют уникальный, характерный только для данного вида возбудителя, фрагмент ДНК или РНК.

·  За счет автоматизации всех этапов ПЦР, длительность метода составляет 6-8 часов.

·  Для проведения ПЦР не требуется выделение и выращивание возбудителя, исследование проводится с использованием клинического материала, который может быть продезинфицирован химической или термической обработкой, в момент взятия, поэтому исключается возможность инфицирования персонала.  

Библиографический список

Основной

1.  Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология //  М.:Медиц. информ. агенство, 2002, 736 с. 

2.  Борисов Л.В., Кузьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С., Федорова З.В. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии // М.: Медицина, 1994, 252 с.

3.  Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 288 с.

4.  Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология // М.: Медицина, 1983, 512 с. с илл.

5.  Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология // Санкт-Петербург: Спец. Литература, 2000, 591 с.

6.  Поздеев О.К. Медицинская микробиология // М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001, 768 с.

7.  Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология // М.: Медицина, 1980,  512 с.

8.  Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 528 с.

9.  Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / Под ред. А.А. Воробьева. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – 691 с.: ил.

Дополнительный

1.  Медицинская микробиология // Под ред. В.И. Покровского, О.К. Поздеева. – Москва: ГЭОТАР-МЕД, 1998, 200 с.

2.  Букринская А.Г. Вирусология // М.: Медицина, 1986, 336 с.

3.  Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии // Под ред. В.В.Теца.-М.: Медицина, 2002, 352 с.

4.  Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А.Воробьева, А.С.Быкова – М.: Медицинское информационное агентство, 2003. – 236 с.; ил.


СОДЕРЖАНИЕ

ЗАНЯТИЕ №20

Тема: Инфекция …………………….………………………………………....3

ЗАНЯТИЕ №21

Тема: Иммунитет. Формы иммунитета. Физиологические

механизмы видового иммунитета ……………………………………………8

ЗАНЯТИЕ №22

Тема: Антигены. Антитела. Классы иммуноглобулинов.

Структура. Свойства. Место образования иммуноглобулинов.

Методы выявления антител и антигенов ………………………….…………14

ЗАНЯТИЕ №23

Тема: Реакции иммунитета. Реакция агглютинации ………………………..17

ЗАНЯТИЕ №24

Тема: Реакция преципитации …………………………………………………25

ЗАНЯТИЕ №25

Тема: Неполные антитела. Реакция Кумбса.

Реакции иммунитета с использованием меченных

антигенов и антител ……………………………………………………………30

ЗАНЯТИЕ №26

Тема:  Реакция иммунного лизиса: бактериолиза, гемолиза.

Реакция связывания комплемента …………………………………………….35 

ЗАНЯТИЕ №27

Тема: Реакция нейтрализации токсина антитоксином.

Реакция флоккуляции ………………………………………………………….42

ЗАНЯТИЕ №28

Тема: Т- и В-системы иммунитета. Взаимодействие

клеток при реализации иммунного ответа. Характеристика

трансплантационного иммунитета.

Оценка иммунного статуса ……………………..…………….. ……………....47

ЗАНЯТИЕ №29

Тема: Особенности противовирусного иммунитета.

Реакции иммунитета при вирусных заболеваниях ..…………..……………...51

ЗАНЯТИЕ №30

Тема: Гиперчувствительность немедленного типа

(В-зависимая аллергия). Ее механизмы. Гиперчувствительность

замедленного типа (Т-зависимая аллергия). Ее механизмы.

Значение при инфекционных заболеваниях …………………..………………60

ЗАНЯТИЕ №31

Тема: Специфическая профилактика и терапия

инфекционных заболеваний  …………………………………………………...63

ЗАНЯТИЕ №32

Тема: Полимеразная цепная реакция в диагностике

инфекционных заболеваний …………………………………………...……….67

Библиографический список ………………….…………………....…………....72