Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций, энтеробактерий. Часть IV: Методические указания к практическим занятиям, страница 6

Пробирки помещают в термостат на 4-6 часов, а затем на 18-20 часов при комнатной температуре. Оценку реакции можно проводить либо по максимальному разведению сыворотки, давшему реакцию на 2 плюса, либо выражать активность  сыворотки в международных единицах (МЕ) антител. Диагностическим является титр сыворотки в агглютинации с единым диагностикумом не менее, чем 1:200. При сомнительных (1:50) или отрицательных результатах реакция Райта, её нужно повторить с интервалом между взятиями крови 7-10 дней. Нарастание титра антител в повторной реакции является достовер­ным для постановки серологического диагноза.

Кроме реакции Райта используют также более чувствительную реакцию пассивной гемагглютинации, в которой в качестве антигена применяют эритроцитарный диагностикум, представляющий собой кон­сервированную взвесь эритроцитов барана, сенсибилизированных бру­целлезным антигеном.

Для ускоренной серодиагностики применяют реакцию агглютинации Хеддльсона. Эта реакция используется при массовых обследованиях и в качестве предварительной диагностической пробы. Её ставят на стекле,  она проста по технике, высокочувствительна и дает резуль­таты в течение нескольких минут.

Для постановки реакции Хеддльсона тщательно обезжиренную стеклянную пластинку расчерчивают на 6 квадратов, в первом квад­рате записывают номер сыворотки, а в остальные наносят сыворотку в соответствующих дозах, к которым добавляют антиген по схеме.

Схема постановки реакции Хеддльсона.

Содержимое каждой капли перемешивают стеклянной палочкой, начиная с минимальной дозы сыворотки. Затем стекло слегка подо­гревают над пламенем примерно до 37°С в течение 2 минут. При положительной реакции в первые минуты появляются хлопья агглютината. Реакция положительна при наличии агглютинации на ++ в дозах сыво­ротки 0,02-0,01 мл. При сомнительном результате реакцию повторя­ют через 7-10 дней.

Реакция Хеддльсона имеет качественный характер, так как по примерным разведениям сыворотки нельзя рассчитать титр сыворотки,

В серологической диагностике бруцеллеза применяют также опсонофагоцитарную реакцию. Эта реакция чувствительна и. специ­фична. Она основана на способности антител опсонинов, титр которых нарастает в крови при бруцеллезной инфекции, усиливать способ­ность сегментированных нейтрофилов фагоцитировать бруцеллы. Реак­ция положительна со второй недели болезни.

         Для постановки этой реакции используют специально приготов­ленный антиген который представляет собой взвесь убитых бруцелл в изотоническом растворе хлориданатрия без консерванта. Нитратную кровь больного смешивают с антигеном, 30 мин выдерживают при 37°С, после чего готовят мазок как мазок крови, который_, после фиксации и окрашивания по Романовскому-Гимзе, микроскопируют с иммерсией. При учете подсчитывают число фагоцитированных  бруцелл в 25 нейтрофилах, после чего   определяют    показатель фагоцитоза. У здоровых людей этот показатель составляет 0 или I, в то время как у боль­ных бруцеллезом достигает 10-75.

 Реакция Кумбса

Реакция Кумбса основана на обнаружении неполных антител, ко­торые в обычных условиях не дают видимой реакции со специфически­ми антигенами. Эта реакция высокочувствительна и специфична, она служит дополнительным диагностическим тестом, особенно при хрони­ческих формах бруцеллеза. Ставят её в два этапа. Сначала как обыч­ную реакцию агглютинации объемным методом,  на втором этапе содер­жимое пробирок с отрицательной или слабоположительной реакцией центрифугируют и к осадку отмытого антигена добавляют антиглобулиновую кроличью сыворотку (сыворотка содержит антитела против глобулинов человека и получена путем   иммунизации кролика сыво­роткой человека). После суточного инкубирования учитывают как обычную реакцию агглютинации.

Биологический метод

Заражение животных проводят главным образом при исследова­ний загрязненного материала - мочи и т.д. Используют наиболее восприимчивых животных (морские свинки, белые мыши). Исследуемый материал в количестве 1-2 мл вводят морским свинкам и в количест­ва 0,5 - 1,0 мл белым мышам под кожу. Кровь можно вводить внутрибрюшинно. Через  и 25 дней после заражения у свинки берут кровь на наличие специфических агглютининов. Через 30 дней после зара­жения животных забивают и делают посевы из печени, селезенки, костного мозга и лимфатических узлов на питательные среды для получения чистой культуры и идентификации. Если используют белых мышей, то заражают 5-ь животных,  из них трех забивают через 30 дней , остальных при отрицательном результате - через 45 дней. Идентификацию культуры проводят по той же схеме, как и при бактериологическом исследовании.

Кожно-аллергическая проба Бюрне.

Проба Бюрне основана на способности зараженного бруцеллами организма формировать гиперчувствительность замедленного типа -на антигены бруцелл и отвечать мастной реакцией на внутрикожное введение аллергена. Эта реакция специфична и высокочувствительна. Сенсибилизация организма формируется и при введений живой вакцины. Она бывает ясно выражена, начиная  с 2-3 месяцев после прививки, держится до года,  затем угасает.