Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций, энтеробактерий. Часть IV: Методические указания к практическим занятиям, страница 3

         Туляремия протекает у человека остро, как септическое заболевание, но накопления возбудителя в крови и органах больных людей невысокое. Обнаружить возбудителя в организме человека ни путем посева, ни путем микроскопии не удается, поэтому ни микроскопический , ни бактериологический метод диагностики не используется, что является особенностью микробиологического исследования при туляремии у человека.

Основные методы микробиологической диагностики

1. Аллергический

2. Серологический

3. Биологический

Аллергический метод

         Этот метод основан на выявлении гиперчувствительности замедленного типа, которая формируется в организме человека на антигены туляремийного микроба. Для этого ставят кожную аллергическую пробу с тулярином, которая высокоспецифична, проявляется с 3-5 дня болезни, является ценным диагностическим методом, накожно и внутрикожно применяют аллерген тулярин.

         Внутрикожную пробу применяют с целью диагностики острых заболеваний, подозрительных на туляремию,  этот метод позволяет выявить гиперчувствительность замедленного типа в более ранние сроки. Пробу ставят на ладонной поверхности предплечья, вводят аллерген с концентрацией  500 млн. убитых бактерий асептично, строго внутрикожно в объеме 0,1 мл. Реакцию учитывают через 24-48 часов . При положительной пробе реакция четко выражена и имеет вид гиперемированного, не редко болезненного отека или инфильтрата кожи. Гиперемия без отека рассматривается как отрицательная реакция.

Накожная аллергическая проба более удобна при массовых обсле­дованиях для выявления поствакциналького иммунитет или иммунной прослойки среди населения.

Для постановки накожной пробы втирают тулярин, содержащий

10 млрд. убитых бактерий в 1 мл, в насечки в наружную noверхность средней трети плеча. Реакцию учитывают через 48-72 часа. При положительной реакции появляется гиперемия и отечность вдоль насе­чек или реакция кожи в размере 0,5 см(поперек насечек).

   Метод аллергической диагностики может быть использован и для ретроспективного диагноза туляремии, так как состояние гиперчувствительности  у переболевших сохраняется многие годы, в боль­шинстве случаев пожизненное

При оценке аллергической пробы следует учитывать, что гиперчувствительность замененного типа формируется и у привитых туляремийной вакциной,  но развивается она позднее, чем у переболев­ших и сохраняется в течении 3-6 лет, после чего угасает.   Серологический метод

Серологический метод основан на обнаружении антител в сыво­ротка больных туляремией, которые накапливаются а диагностическом титре уже со 2-й недели заболевания и обнаруживаются спустя мно­го лет после  перенесенной болезни. Основным методомобнаружения антител является реакция агглютинации. Ставят реакцию объемным методом с сывороткой больного, которую разводят от 1:12,5 до 1:400. В качестве антигена используют туляремийный диагностикум, содержащий взвесь убитой культуры туляремийного микроба в концент­рации 25 млрд., микробов в I мл. Так как диагностикум добавляют к разведениям сыворотки в равном объеме, то его разводят перед, по­становкой реакций в 5 раз.

Результат реакции учитывают после 2 часов стояния в термо­стате при 37⁰ и выдерживания 20-22 часов при комнатной температуре. Реакцию считают положительной, если в разведений сыворот­ки I: 100 и выше обнаруживается значительное просветление жидкости и образование хорошо выраженного осадка (мелкозернистая агглю­тинация на 2 плюса), который  при легком встряхивании поднимается со дна.

Нужно учитывать, что антитела могут присутствовать в кро­ви у вакцинированных или переболевших туляремией в прошлом, поэто­му для постановки серологического диагноза решающее значение име­ет нарастание титра антител, которое  определяют обязательно при повторной постановке реакции через 7-10 дней.

1. Постановка реакции агглютинации с сывороткой больного туляре­мией по схеме:

Пробирки Ингредиенты, мл.	1	2	3	4	5	6	7
1.Физеологический раствор в мл.	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
2. Сыворотка больного 1:12,5 в мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	- 0,5в лизол	0,5 разв. 1:12,5
3. Диагностикум в мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	-
Окончательное разведение сыворотки	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800

При наличии острого заболевания туляремией титр агглютининов  за этот период резко возрастает. Если же получают сомнитель­ный результат реакцию повторяют в третий раз.

Для ускорения результатов пробы при массовых обследованиях применяют кровяно-капельную реакцию агглютинации, но она не позволяет выявить антитела в ранние сроки болезни и не отражает динамику нарастания титра антител. Дляпостановки реакции у больно­го из пальца берут кровь,  наносят её в виде толстой капли на предметное стекло,  добавляют каплю дистиллированной воды, чтобы лизировались эритроциты,  это облегчит учет реакции. Рядом на предметное стекло наносят каплю диагностикума, смешивают с гемолизированной кровью. Если в крови больного содержатся антитела в высоком титре (1:100 более), агглютинациямикробов наступает немедленно. Если же  агглютинация наступаетчерез 2-3 мин., её диагностическое значение сомнительно.

               РСК для постановки серологического диагноза туляремии не               применяют, так как она не имеет преимуществ перед другими реакциями.

В последние годы в диагностике используют РПГА, она более чувствительна, чем обычная реакция агглютинации. Для постановки ее используют эритроцитарный диагностикум – консервированную взвесь эритроцитов, сенсибилизированных туляремийным антигеном.

Биологический диагноз

            Биологический диагноз основан на обнаружение возбудителя в материале, взятом от больного, которым заражают высокочувствительных к возбудителю животных, с последующим выделением и идентификацией туляремийного микроба.