Основными методами лабораторной диагностики холеры являются:
I. Бактериологический
2. Микроскопический
3. Серологический
Холеру трудно отличить от других острых кишечных заболеваний, проявляющихся профузным поносом, рвотой, резким обезвоживанием, поэтому важным методом постановки диагноза служит бактериологическое исследование.
Бактериологический диагноз проводят с целью выделения возбудителя холеры от больных, установления вибриононосительства и установления путей распространения инфекции.
Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, от трупа исследуют отрезки из верхней, средней и нижней трети тонкого кишечника. Участки тонкой кишки вырезают между лигатурами и помещают в стерильные банки.
При взятии материала нужно помнить, что холерные вибрионы очень чувствительны к дезинфицирующим веществам, поэтому посуда не должна содержать даже их следов.
Испражнения : на исследование берут 10-20 мл последних порций испражнений из подкладного судна, обмытого кипятком ,деревянной, металлической или картонной ложкой, переносят в стерильные баночки (предварительно анкетированные), плотно закрывающиеся пробками (корковыми или стеклянными). Под пробки подкладывают пергаментную бумагу, а сверху обвязывают двойным слоем вощеной или пергаментной бумаги.
Можно собирать материал с помощью резинового катетера непосредственно из пряной кишки , или ректальной петлей, сделанной из алюминиевой проволоки. В этих случаях материал обязательно помещают в пробирку с 1% пептонной водой или другой консервирующей жидкостью.
Рвотные массы: 10-15 мл собирают металлической ложечкой и переносят в стерильную широкогорлую банку.
Материал от больного необходимо брать до начала антибактериальной терапии.
Для выявления носительства при массовых обследованиях по
эпидпоказаниям делают групповые посевы от 4-5 обследуемых, материал засевают в одну колбу с 1% пептонной водой. При положительном ответе материал берут снова и засевают индивидуально.
При установлении путей передачи на исследование берут воду, пищевые продукты, смывы с объектов внешней среду, отлавливают мух. Образцы всех проб плотно укладывают в металлическую посуду (бикс, ведро и т.д.), перекладывая стружками, бумагой и т.д, помещают в деревянный ящик, который опечатывают, прилагают сопроводительный документ с перечислением отправляемых материалов указанием предполагаемого диагноза, времени, места взятия материала и фамилией собиравшего материал и нарочным доставляют в лабораторию.
Бактериологический диагноз
Если материал взят без консерванта, то посев его лучше всего проводить у постели больного. При невозможности сделать это, исследование проводят не позднее 3 часов от момента взятия.
Бактериологическое исследование на холеру заключается в выделении чистой культуры и её идентификации на оснований морфологических, культуральных, биохимических свойств, лизабельности специфическими фагами и антигенной структуры.
При выделении холерных вибрионов учитывают некоторые его биологические свойства: неприхотливость к питательным средам (используют малопитательные среды, на которых рост других микробов замедляется), способность размножаться в щелочных средах, высокая скорость размножения. Последнее свойство дает возможность максимально сблизить интервалы между исследованиями и производить работу поэтапно. Пересевы на жидкие среды делают через 6-8 часов, на плотные - через 12-18 часов. Поэтапное исследование требует круглосуточной работы лаборатории.
Этапы исследования и идентификации холерных вибрионов Первый этап
Исследуемый
материал засевают на жидкие и твердые питательные среды для выделения
вибрионов, микроскопируют. В качестве жидких питательных сред используют щелочную 1%
пептонную воду, 1% пептонную воду с теллуритом калия. Из плотных
сред применяют простые среды - щелочной агар, агар на
переваре Хоттингера и селективные среды.
В жидкие среды первично засевают 0,2-0,5 мл материала в соотношении 1:10 для накопления вибрионов, при легких формах холеры и исследовании на носительство объем высеваемого материала увеличивают.
При посеве на плотные среды материал наносят пипеткой или петлей на поверхность агара, а затеи растирают шпателем. Можно засевать материал петлей. Посевы помещают в термостат при 37°С.
Если есть основание предполагать, что в материале присутствует холерный фаг, он может помешать выделению возбудителя, то посевы делают на среды, содержащие антифаговую сыворотку.
При микроскопическом исследовании из нативного, материала готовят мазки, фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают водным фуксином и по Граму. При обнаружении в мазке грамотрицательных изогнутых палочек, сходных с холерным вибрионом, изучают подвижность в простом и фазово-контрастном микроскопе, приготовив препарат «висячую» или «раздавленную» каплю. Для холерных вибрионов характерна очень активная подвижность.
Вместе с тем холерные вибрионы отличаются выраженным полиморфизмом, поэтому в мазке могут встречаться и нетипичные вибрионы в виде мелких кокковидных и палочковидных форм, сходные с энтеробактериями, длинных палочек, спиралевидных форм.
Для микроскопии материала применяют метод иммунофлюоресценции. Мазки из нативного материала обрабатывают иммунными флюоресцирующими холерными сыворотками и изучают в люминесцентном микроскопе. При значительном обсеменении материала холерными вибрионами этот метод уже в первые часы позволяет поставить диагноз.
Второй этап
Через 6-8 часов изучают рост на первой среде накопления. Холерные вибрионы на малопитательной среде, интенсивно размножаясь, опережают рост сопутствующей флоры и скапливаются на поверхности среды в виде просвечивающей нежной голубоватой пленки. Позднее вибрионы дают на среде гомогенную муть.
Пленку исследуют в мазке, окрашенном по Граму, изучают подвижность микробов, находящихся в пленке. При обнаружении подвижных бактерий, сходных с холерными вибрионами, ставят реакцию агглютинации с холерной 0-сывороткой. Наблюдают агглютинацию невооруженным глазом, а лучше оценивать результат при небольшом увеличений микроскопа, приготовив препарат «раздавленная» капля.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.