Сбор материала и исследование проводят в строго режимных условиях, в связи с этим культуры выделяют при особой в том необходимости (выявление новых, неизвестных ранее очагов туляремии, исследовательских целях).
Выбор исследуемого материала зависит от клинической формы болезни. От больного берут кровь из вены(стерильным шприцом в стерильную пробирку), содержимое бубона ( берут стерильным шприцом), отделяемое язвы, слизистой глаза, зева(собирают сухим стерильным тампоном), мокроту, испражнения(собирают в стерильные широкогорлые банки).
Исследование проводят в возможно ранние сроки от начала заболевания и по возможности до применения антибиотиков.
При выявление очага туляремии исследуются в специальных условиях грызуны и их выделения, членистоногие(клещи, блохи, комары, слепни, вода пищевые продукты).
Исследуемым материалом заражают белых мышей и морских свинок, вводят материал под кожу. По возможности используют оба вида животных, мыши погибают от туляремии быстрее и из их органов легче выделить культуру возбудителя. Преимущество свинок в том, что им вводят больше количество материала, кроме того свинки погибают позднее, поэтому у них ярче выражены специфические изменения внутренних органов, что может облегчить задачу исследования.
При наличии туляремийных микробов животные погибают (мыши на 3-9 сутки, морские свинки 4-15 сутки). Павших животных вскрывают как можно раньше после гибели. При этом наблюдают характерное увеличение и воспаление лимфатических узлов, некротические участки в легких, печени, селезенке. Из этих органов, а так же места введения материала готовят мазки- отпечатки на предметных стеклах. Мазки фиксируют в смеси Никифорова или метанолом, но не в пламени спиртовки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и исследуют под микроскопом.
Для ускоренной диагностики, а также для облегчения идентификации возбудителя используют метод люминесцентной микроскопии, обрабатывая мазки флюоресцирующими антителами.
Параллельно с микроскопией производят посевы на питательные среды. Так как туляремийные микробы на простых средах не растут, для их выделения используют специальные среды: Мак Коя, агар Д с кровью или желтком.
Рост колоний можно обнаружить уже на вторые сутки, но чаще они становятся заметными через более длительное время. Если роста нет, то посевы выдерживают в термостате до 10 суток, после чего выдают отрицательный ответ.
Выделенную культуру идентифицируют в реакции агглютинации с туляремийной диагностической сывороткой. Реакцию ставят в пробирках объемным методом, культура может быть отнесена к туляремийному микробу, если она агглютинируется сывороткой не менее, чем на 2/3 ее титра.
Ферментативная активность туляремийных бактерий выражена слабо, для идентификации возбудителя не используется, при определении разновидности (американская, европейская) изучают способность ферминтотировать глицерин. Ферментация глицерина характерна для американской разновидности туляремийного микроба.
Окончательный диагноз туляремии ставят на основании изучения морфологических и тинкториальных свойств выделенной культуры, отсутствию роста на простом агаре и бульоне, агглютинабельности специфической сывороткой в высоких разведениях. Желательна проверка вирулентности культур на белых мышах и свинках. Если животные, зараженные материалом от больного, выживают, их забивают и исследуют так же, как и погибших. Чтобы ускорить выделение культуры, материалом заражают несколько мышей (3-5) и , не дожидаясь их гибели, ежедневно, начиная с третьих суток, забивают и исследуют по одной мыши. Последнюю оставляют до гибели или забивают на 15 день после заражения.
Если в лабораторию поступают трупы павших животных, то параллельно с выделением возбудителя, определяют туляремийный антиген в тканях. Для этого ставят реакцию преципитации по типу реакции термопреципитации Асколи.
2. Изучение и зарисовка демонстрационных мазков
3. Изучение препаратов для специфической профилактики туляремии
Тема: Brucella. Морфология, биология, культурные свойства возбудителя бруцеллеза. Лабораторный диагноз. Профилактика.
Цель заняли: Ознакомить студентов с биологической характеристикой возбудителей бруцеллеза» эпидемиологией, методами микробиологической диагностики, препаратами для специфической профилактики и диагностики бруцеллеза
Контрольные вопросы:
1. Классификация бруцелл
2. Биологическая характеристика бруцелл
3. Эпидемиология и патогенез бруцеллеза
4. Методы микробиологической диагностики бруцеллеза
5.
Особенности иммунитета при бруцеллезе
6. Специфическая профилактика бруцеллеза
Методические указания к демонстрации
1. Мазок из чистой культуры бруцелл окрашенный по Граму
В мазке из чистой культуры бруцелл видны в виде очень мелкихмикробов шаровидной или овоидной формы, грамотрицательные, без какой-либо определенной группировки.
2. Живая вакцина
Живая бруцеллезная вакцина представляет собой взвесь живой культуры вакцинного штамма бруцелл абортус I9-6A, высушенную методом сублимации.
Вакцину применяют для вакцинации и ревакцинаций людей против бруцеллеза. Показанием к введению вакцины является наличие бруцеллезной инфекции у мелкого рогатого скота или выделение бруцелл овечьего вида от других животных. Иммунитет на введение вакцины формируется к концу 1-го месяца, сохраняя наивысшую напряженность в течение последующих 5-6 месяцев.
3. Бруцеллезная лечебная вакцина
Лечебная вакцина представляет собой взвесь убитых нагреванием бруцелл овечьего и коровьего видов. Вакцину используют при лечения больных бруцеллезом в острой, подострой и хронической формах, вводят ее внутривенно или внутрикожно* Введение вакцины активирует иммунную систему организма и повышает эффективность антибактериальной терапии.
4.Бруцеллин (аллерген) для .постановки кожно-аллергической пробы Бюрне
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.