Для определения вида выделенной культуры изучают антигенную структуру её в реакции агглютинации с сальмонеллезными сыворотками. Серологическое определение начинают постановкой агглютинации по схеме с сальмонеллезной сывороткой групп АВСДЕ, содержащей антитела к наиболее часто встречающимся сальмонеллам. При положительном результате определяют серогруппу культуры с помощью монорецепторных сывороток. Сначала изучают 0-антиген. Для этого используют монорецепторные сыворотки 0-2, 0-4, 0-6, 0-9. Если в одной из капель наступает реакция агглютинации, по таблице определяют серологическую группу и в пределах установленной группы изучают жгутиковые антигены также в реакции агглютинации на стекле. Для постановки реакции используют монорецепторные сыворотки против жгутиковых антигенов (H) в специфической фазе, что позволяет определить вид сальмонеллы.
Если культура типична по биологической характеристике и по изученным антигенам укладывается в известные серовары, то можно считать идентификацию законченной. Если ость отклонения в антигенной структуре, то культура требует расширенного изучения. На основании оценки полученных данных дают заключение.
Посев другого исследуемого материала (испражнений, мочи, дуоденального содержимого) производят параллельно двумя способами : прямым и на среды обогащения. Прямой посев производят на дифференциально-диагностические среды - Эндо, Левина, Плоскирева. Посев на среды обогащения, где возбудитель размножается лучше и быстрее, чем сопутствующие, обязательно делают при обследовании здоровых лиц и бактерионосителей, так как они выделяют небольшое количество бактерий. Вместе с тем, учитывая широкое применение населением антибиотиков, среды накопления используют и при посевах с диагностической целью и в особенности – по эпидемическим показаниям . Предложено большое количество сред накопления: селенитовая, Мюллера. Посевы выдерживают в термостате при 37о около суток.
2 день
Просматривают чашки и изучают выросшие колонии невооруженным глазом и при помощи лупы. 5-6 подозрительных колоний выделяют на среду Олькеницкого. Из сред обогащения делают высев на дифференциально-диагностические среды. Посевы ставят в термостат
3 день
Идентификацию выделенной культуры проводят также как и идентификацию гемокультуры. После окончания исследования выдают результат . Серологический диагноз брюшного тифа и паратифов
Серологический диагноз брюшного тифа и паратифов основан на обнаружение антител (агглютининов) к сальмонеллам тифа и паратифов.
Агглютинины у больных появляется на 4 дню болезни, а к 8-10 дню количество их резко нарастает, достигая максимума к началу выздоровления. Серологическое исследование может быть использовано для ретроспективного диагноза. Наиболее часто антитела определяют в реакции агглютинации- реакция Видаля. Реакция Видаля характеризуется простой постановки, это делает ее доступной для любой лаборатории.
Для постановки реакции Видаля из крови больного получают сыворотку. Для этого из мякоти пальца или локтевой вены берут 2-3 мл. крови в стерильную пробирку, ставят в термостат на 20-30 минут для свертывания, чтобы лучше отделилась сыворотка, пробирку ставят на 30-40 минут на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и готовят основное разведение сыворотки 1:50. Чтобы получить это разведение, нужно взять 0,1 мл. сыворотки и добавить 4,9 мл. физиологического раствора. Из основного разведения готовят рабочее разведение сыворотки от 1:100 до 1:800-1:1600 и т.д. К каждому разведению добавляют антиген. Учитывая, что по клинической картине нельзя отличить тиф от паратифов, реакцию ставят с тремя диагностикумами: брюшнотифозным, паратифозным А и В, готовя для каждого антигена ряд разведений сыворотки.
При оценке полученных результатов необходимо учитывать индивидуальные отклонения. В ослабленном организме антитела вырабатываются медленно и слабо, сопутствующие заболевания также могут
задержать их образование. Поэтому при отрицательном результате нельзя исключать заболевание.
Диагностическим считают титр реакции 1:200, у некоторых людей с проявлениями клиники заболевания положительной считают реакцию в титре 1:100.
Реакция Видаля может быть положительной при любом лихорадочном заболевании у прежде переболевших брюшным тифом (анамнестический Видаль) и у привитых людей (прививочный Видаль).
Диагностическая значимость реакций Видаля может быть доказана, если эту реакцию поставить в динамике. Ни при «анамнестическом» ни при «прививочном» Видале нарастания титра антител не наблюдают.
При серологическом обследовании бактерионосителей диагностическое значение имеет обнаружение Ви-антител, Ви-антитела определяют в испытуемой сыворотке, которую разводят от 1:10 до 1:320 -1:640. Высокой чувствительностью характеризуется реакция непрямой Ви-агглютинации с эритроцитарным Ви –диагностикумом.
2. Изучение этапов ранней диагностики брюшного тифа (метод гемо-
культуры)
2.1. Изучить характер роста на 10% желчном бульоне, в который накануне была засеяна кровь больного. Позже описания посевов из флакона сделать высев петлей на среду Эндо. Посевы поместить в термостат на сутки.
2.2. Изучить посевы на среде Эндо, описать выросшие колонии. Из бесцветных круглых выпуклыхпрозрачных колоний сделать пересев на среду Олькеницкого штрихом по скошенной поверхности и уколом в глубину столбика. Посевы поместить в термостат на 18-20 часов.
2.3. Изучить посевы на среде Олькеницкого. Для дальнейшего исследования отобрать только те пробирки,в которых среда посинела в столбике (ферментация глюкозы). Пробирки, в которых вся среда посинела (ферментация лактозы или сахарозы) или стала оранжевой (ферментация мочевины) из исследования исключить.
Культуры, ферментирующие глюкозу до кислоты ине ферментирующие лактозу и сахарозу подозрительнына сальмонеллы тифа.
Культуры, ферментирующие глюкозудо кислотыи газа и не ферментирующие лактозу и сахарозу, подозрительны на паратифозные бактерии.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.