Для затравки была изготовлена герметичная камера из оргстекла объёмом 5 л. Крыс помещали в камеру и через газоотводную трубку добавляли в атмосферу камеры 10 мл угарного газа. Время экспозиции – 10 минут. После затравки животное наркотизировали тиопенталом натрия 40 мг/кг веса внутрибрюшинно, для предотвращения свертывания крови вводили 0,5 мл гепарина в бедренную вену. Образцы крови объёмом 1 мл забирали из нижней полой вены в течение 5, 10, 15, 20, 25, 30 и 45 минут и подвергали лазерному облучению. Контрольные образцы выдерживали в герметичном, закрытом от доступа света пенале в течение этих же периодов времени. Для определения эффективности изолированного воздействия гипохлорита натрия во взятые образцы добавляли раствор 0,06% гипохлорита натрия, в соотношении на 1 мл крови 0,1 мл NaClO и инкубировали в течение 5, 10, 15, 20, 25, 30 и 45 минут.
2.5. Методика изучения изолированного и сочетанного воздействия лазерного излучения и гипохлорита натрия при отравлении CO в экспериментах in vivo
Проводилась затравка двух крыс по описанной методике. После лапаротомии проводилось канюлирование нижней полой вены опытного животного, позволяющее проводить внутривенное введение гипохлорита натрия и взятие образцов крови через 5, 10, 15, 20, 25, 30 и 45 минут после начала, с одновременным облучением области нижней полой вены.
2.6. Статистическая обработка результатов
Статистическая обработка результатов проводилась на персональном компьютере IBM PC 486 с помощью программы Microsoft Excel для Windows’95. Достоверность результатов подсчитывалась с использованием критериев Стъюдента и Бейли.
Гемопротеиды являются веществами, способными претерпевать фотоиндуцированные изменения при воздействии на них источников оптического излучения. В работе было исследовано воздействие излучения Nd-YAG лазера на растворы (1,2×10-4Mc, pH=7,4, при t=20°) дезокси- и карбоксигемоглобина при максимальной концентрации последнего 75% in vitro.
Нами был установлен факт фотоиндуцированной диссоциации карбоксигемоглобина при воздействии импульсного лазерного излучения (режим flash-фотолиза), носящий обратимый характер: после прекращения воздействия фотолизирующего излучения наблюдалась спонтанная реассоциация лиганда с гемопротеидом (Рис. 2). При воздействии лазера в режиме flash-фотолиза наблюдалось изменение интенсивности зондирующего излучения, равное 7,91±0,27 условных единиц. Уменьшение оптической плотности раствора карбоксигемоглобина на длине волны, равной 570 нм, что соответствует максимуму поглощения этой формы гемопротеида (39, 65, 66), свидетельствует об уменьшении концентрации карбоксигемоглобина в растворе.
При проведении контрольных экспериментов установлено, что дезоксигемоглобин не претерпевает фотоиндуцированных изменений при работе в том же режиме облучения, что является доказательством специфичности реакции фотодиссоциации в отношении карбоксиформы гемоглобина (Рис. 2)
Известно, что при острых отравлениях CO концентрация карбоксигемоглобина крови может значительно варьировать (68, 77, 101, 112). С другой стороны, имеются литературные данные о том, что поведение белковых молекул в растворах определяется, в числе прочих факторов, концентрацией их лигандированных форм (96, 118, 157, 99, 181). Все это актуализирует задачу изучения особенностей реакции индуцированной фотодиссоциации при различных исходных уровнях карбоксигемоглобина.
В серии экспериментов, исследующих зависимость изменения интенсивности зондирующего излучения DI, прошедшего через раствор карбоксигемоглобина, от степени насыщения раствора CO оказалось, что максимальный эффект лазерного излучения был достигнут при его воздействии на раствор, содержащий 46 % карбоксигемоглобина. При более высоких концентрациях карбоксигемоглобина в растворе эффективность реакции фотодиссоциации была значительно меньше. Дальнейшее же снижение концентрации карбоксигемоглобина путем замещения газовой фазы аргоном (ниже 46 %) не приводило к увеличению изменения интенсивности зондирующего излучения (Рис. 3)
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.