Контроль концентрации HbCO проводился спектрофотометрически, на спектрофотометре «СФ-26». Для этого измерялась оптическая плотность раствора Hb на длине волны 534 нм (D1), где имеется наибольшая разница в светопоглощении HbCO и Hb и на длине волны 563 нм (D2), где пересекаются кривые поглощения HbCO и Hb (изосбестическая точка). Непосредственно перед спектрофотометрией к 3 мл раствора Hb добавляли 10 мг Na2S2O4 для перевода всех форм Hb, кроме HbCO в дезоксигемоглобин, так как используемая методика пригодна только для исследования двухкомпонентных смесей (HbCO и Hb). Присутствие других дериватов Hb искажает результаты. Расчет концентрации Hb проводился по формуле:
2.2. Получение угарного газа и HbCO
Для получения угарного газа концентрированную серную кислоту нагревали до 60°С и проводили титрование ее 80% муравьиной кислотой. Очистку полученного CO проводили, пропуская его через раствор содержащий 20 мл 25% водного раствора пирогаллола и 10 мл 60% водного раствора KOH.
Полученные растворы смешивали в концентрации 1:5 в темной посуде ex tempore. Раствор Hb содержащий 69% HbCO, получали добавляя 5 мл CO в колбу объемом 100 мл, содержащую 10 мл 1,2×10-4 М исходного раствора Hb. Концентрация HbCO измерялась через 5 минут после добавления CO (43).
2.3. Изучение флеш-фотолиза на экспериментальной лазерной установке с перекрещивающимися пучками
Регистрация эффективности физического воздействия велась на экспериментальной лазерной установке для изучения флеш-фотолиза с перекрещивающимися пучками (Рис. 1). Установка включала: 1 – импульсно-периодический Nd-YAG лазер с удвоением частоты l=533 нм, изменяющейся частотой следования импульсов генерации в предела от 1 до 50 Гц и соответственно средней мощностью от 5 до 300 мВт, что обеспечивало плотностью мощности фотолизирующего пучка от 10 мВт/см2 до 0,6 Вт/см2; 2 – зондирующего осветителя лампы накаливания мощностью 25 Вт, излучение которого пропускалось через светофильтр ЖС-16 (светофильтр «отсекал» инфракрасное излучение и тем самым предотвращал нагрев кюветы). Осветитель питался от стабилизированного источника питания с коэффициентом стабилизации не ниже 103, 3 – монохроматора «МСД-2», 4 – фотоэлектроумножителя (ФЭУ-39) с высокостабильным высоковольтным блоком питания и разностной схемы выделения сигнала с помощью которой устанавливался ноль сигнала (установка нуля производилась с помощью подбора напряжения смещения от гальванического элемента питания) при отсутствии зондирующего излучения; 5 – графопостроителя; 6 – термостатируемой герметичной кюветы объемом 3 мл; 7 – теплового фильтра. Установка обеспечивала регистрацию изменения оптической плотности не хуже 0,001 D.
Исследуемый раствор помещали в кювету, включали лампу зондирующего излучения, монохроматором выделялась необходимая длина волны, включался блок питания фотоэлектроумножитель (ФЭУ), включался гальванический элемент напряжения смещения, на графопостроителе устанавливался ноль с помощью изменения как ширины входной щели монохроматора так и переменного резистора, включенного в разностную схему. После установки «0» включалось лазерное фотолизирующее излучение и графически фиксировалась динамика изменения оптической плотности. Интенсивность фотолизирующего излучения получали, изменяя частоту следования импульсов импульсно-периодического Nd-YAG лазера.
После наполнения кюветы раствором HbCO постоянная температура поддерживалась в ней с помощью нагревателя, питающегося от управляемого источника постоянного тока, датчиком температуры в кювете служил калиброванный теплорезистор типа ММТ-4, отверстие кюветы герметизировалось в ходе эксперимента.
Рис. 1. Экспериментальная лазерная установка для исследования флеш-фотолиза HbCO.
Обозначения: 1–Nd-YAG лазер, 2–лампа зондирующего излучения, 3–монохроматор, 4–фотоумножитель, 5–графопостроитель, 6–термостатируемая герметичная ячейка с раствором HbCO, 7–тепловой фильтр
2.4. Острая затравка крыс угарным газом
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.