Изучение влияния различных факторов на амилолитическую активность ячменного солода, из приморских сортов ячменя, страница 5

Таблица 3 – Приготовление буферных растворов

Затем в каждую пробирку приливали по 5 мл 2 %-ного раствора крахмала и по 2,5 мл экстракта солода. Содержимое пробирок после приливания экстракта тщательно перемешивали и оставляли на 10 минут. По прошествии этого времени брали через каждую минуту пробу (2-3 капли) из седьмой пробирки и добавляли две капли йода. Спустя 2 минуты после того, когда содержимое этой пробирки давало красно-бурое окрашивание, во все пробирки добавляли по несколько капель йода и взбалтывали. Раствор йода  приливали, начиная с первой пробирки, через равные промежутки времени, т.е. через 30 секунд.

На основании полученной окраски содержимого пробирок можно судить о степени расщепления крахмала в зависимости от рН. Там, где получилась слабо-желтая окраска, крахмал расщепился полностью, и, следовательно, рН был оптимальным.

2.4.2 Изучение влияния температуры активность  b-амилаз

В мерную колбу на 100 мл вносили 50 мл 2 %-ного раствора крахмала и 5 мл фосфатного буфера с рН 5,6. Содержимое колбы доводили до заданной температуры (нагревают или охлаждают), после чего вносили 5 мл ферментного препарата, предварительно термостатированного при той же температуре и замеряли время. Гидролиз продолжался 30 минут, в течение которых строго следили за поддержанием постоянной температуры. Через 30 минут в колбу вносили 10 мл раствора сернокислой меди ω(CuSO4) = 6 % для прекращения действия фермента, содержимое колбы охлаждали и доводили водой до метки.

Количество образовавшейся мальтозы определяли методом Бертрана.

Полученные результаты сводили в таблицу и строили график, характеризующий влияние температуры на активность β-амилазы.

2.4.3 Определение осахаривающей способности b-амилазы

В мерную колбу на 100 мл вносили 50 мл 2%-ного раствора крахмала и 5 мл фосфатного буфера с рН 5,6. Содержимое пробирки прогревали в водяной бане при 40 ºС в течение 15 минут. Затем в колбу вносили 5 мл ферментного препарата β-амилазы. Раствор в колбе перемешивали и снова ставили в водяную баню при той же температуре на   30 минут. По истечении этого времени ферментативный процесс гидролиза крахмала останавливали путем добавления 10 мл раствора сернокислой меди ω(CuSO4)= 6 %. После этого раствор охлаждали до комнатной температуры и доводили водой до метки. Количественное определение сахаров производили по методу Бертрана. Мерой активности β- амилазы служит количество разложившегося крахмала, выраженное в процентах от его первоначального веса.

Массовую долю сахарозы в продукте S, %, вычисляли по формуле (Fischer et al. 1975).

, где - масса сахарозы, содержащаяся в 20 мл фильтрата, г;

 - масса продукта, соответствующая 20 мл фильтрата, г.

2.5 Исследование влияния  условий солодаращения на  амилолитическую активность ячменного солода из приморского ячменя Приморский 89

Для изучения влияния физико-химических факторов на накопление амилолитических ферментов в процессе солодоращения была приготовлена серия ячменных солодов из приморского ячменя сорта Приморский 89 в различных условиях (таблица 4). В каждом образце солода определяли амилолитическую активность по отработанному методу.

Таблица 4 – Условия солодоращения

IIIрезультаты и обсуждение