Хроматографические методы анализа: Учебное пособие, страница 28

6.  Сухие стеклянные стаканчики.

7.  Стеклянные капилляры, автоматическая микропипетка.

Сущность работы

Пластины «Silufol UV-254» или аналогичные, имеющие однородный высококачественный слой сорбента, могут быть использованы как для идентификации компонентов, поглощающих в видимой или УФ-области спектра, так и для количественного определения разделяемых компонентов. Полуколичественный анализ красителей можно провести на основании зависимости размера пятна и интенсивности его окраски от количества компонента с помощью калибровочного графика.

Выполнение работы

1.  Нанесение проб. На пластинку наносят стеклянным капилляром или микропипеткой растворы «свидетелей» и анализируемой смеси в следующем порядке: АЗ, ДР, АЖ, ДК, ХР, БЗ, анализируемая смесь, КФ (5–10 мкл).

2.  Хроматографирование. Пластину помещают в камеру с подвижным растворителем, после подъема растворителя на высоту    10–12 см пластину вынимают и высушивают на воздухе.

3.  Идентификация компонентов. Пластину рассматривают в видимом и ультрафиолетовом свете, обращая внимание на окраску и форму хроматографических зон. Рассчитывают значения  R_f «свидетелей» и компонентов смеси. Определяют качественный состав анализируемой смеси.

4.  Определение содержания хризоидина в смеси с бриллиантовым зеленым. Готовят растворы, содержащие хризоидин и бриллиантовый зеленый в разных количественных соотношениях, для чего с помощью микропипетки отмеряют соответствующие объемы растворов этих компонентов (в мкл):

На пластинку с помощью микропипетки наносят растворы хризоидина в объеме 2, 6, 10 мкл и по 10 мкл смесей 1, 2, 3. После хроматографирования сравнивают размеры и интенсивность окраски хроматографических зон хризоидина для анализируемой смеси и калибровочных растворов.

Задания и вопросы

1.  Идентифицируйте компоненты анализируемой смеси. Можно ли считать разделение удовлетворительным?

2.  На основании экспериментальных данных оцените содержание хризоидина в смесях 1, 2, 3 и сравните с истинным содержанием. Обсудите с преподавателем возможность количественного определения компонентов по предлагаемой методике.

3.  Проявляется ли на Ваших хроматограммах зависимость  R_f и формы зоны от количества компонента?

4.  Сравните методику ТСХ с закрепленным и незакрепленным слоем сорбента, укажите преимущества и недостатки пластин обоих типов.

ТСХ 3. Качественный анализ лекарственных препаратов    методом ТСХ

Приборы, реактивы, посуда

1.  Камера для хроматографирования.

2.  Хроматоскоп.

3.  Пластина «Silufol UV-254» (15 × 15 см) или аналогичные.

4.  Растворитель – хлороформ + этиловый спирт (9:1 по объему).

5.  Спиртовые растворы (5 мг/мл) анальгина, амидопирина, бутадиона, димедрола, кофеина, ношпы, папаверина, теобромина, теофиллина, фенобарбитала (набор компонентов может быть изменен).

6.  Анализируемая смесь или таблетка препарата.

7.  Тефлоновая ступка, стеклянный бюкс.

8.  Стеклянные капилляры.

9.  Сухие стеклянные стаканчики.

Сущность работы

Метод ТСХ является в настоящее время незаменимым методом для анализа и контроля степени чистоты ле­карственных препаратов и используется как в фармацевтической промышленности,  так и в клиническом анализе. Наиболее удобно проводить эти анализы на готовых хроматографических пластинках типа «Силуфол», «Луцефол», «Алуфол» и др., которые имеют устойчивую однородную поверхность, хорошо хранятся, их можно резать, нагревать, делать на них записи. Пластины «Silufol UV-254», или аналогичные, представляют собой алюминиевую фольгу, покрытую тонким слоем диоксида кремния со связующим веществом – маисовым крахмалом и флуоресцентным индикатором. Соединения, не окрашенные в видимой области, но имеющие систему сопряженных связей, можно обнаружить по их поглощению в УФ-области спектра или флуоресценции. В других случаях требуется проявление хроматограмм.