Хроматографические методы анализа: Учебное пособие, страница 26

Скорость движения компонента при разделении методами БХ и ТСХ зависит от многих условий эксперимента (свойств бумаги и сорбента, природы растворителя, продолжительности хроматографирования, температуры и т. д.), но различие в скоростях анализируемых компонентов, определяющее возможность их разделения, зависит от различия их коэффициентов (констант) распределения. Скорость движения компонента в этих хроматографических системах принято характеризовать относительной величиной Rf, которая определяется как отношение расстояния, пройденного центром зоны, к расстоянию от линии старта до фронта растворителя. Эта величина является качественной характеристикой компонента. При определенных условиях разделения и в сочетании с окраской и формой зоны Rf  служит для идентификации. Для отнесения хроматографической зоны значение Rf, а также ее окраска (иногда для этого необходимо проявление хроматограммы) и форма сопоставляются с параметрами «свидетелей».

Количественное определение компонентов после разделения их на бумаге или в тонком слое можно выполнить, элюируя отдельные компоненты с полученных хроматографических зон. Для определения концентрации их в растворе обычно используются достаточно чувствительные физико-химические или физические методы с предварительной калибровкой. Количественную оценку по результатам хроматографического разделения можно провести также на основании существующей зависимости между размером хроматографической зоны, интенсивностью ее окраски и количеством вещества. Наиболее удобен количественный анализ по бумажным и тонкослойным хроматограммам методом денситометрии, когда при сканировании хроматограмм лучом монохроматического света регистрируется сигнал, отвечающий интегральной функции от размера зоны и интенсивности ее окраски, зависящей от количества компонента.

Следует заметить, что с развитием методов колоночной ЖХ, особенно микроколоночной ВЭЖХ, методы количественного анализа на бумаге и в тонком слое постепенно теряют свое значение. При наличии соответствующего оборудования количественный анализ микроколичеств компонентов может быть выполнен быстрее и с большей точностью.

Название методов ТСХ и БХ отражает лишь определенный экспериментальный прием хроматографического разделения, механизм же разделения на бумаге и в тонком слое может быть самый разнообразный: распределение между двумя жидкими фазами, адсорбция, ионный обмен, хемосорбция и т. д. В реальном хроматографическом эксперименте разделение, как правило, протекает по сложному механизму, и название метода обычно отражает механизм доминирующего процесса.

Для разделения методом ТСХ на оксиде алюминия и диоксиде кремния характерно сочетание процессов адсорбции, распределения, ионного обмена и др. В предлагаемых задачах по ТСХ используются как готовые пластины промышленного изготовления, так и приготовленные непосредственно в практикуме.

Существенным недостатком метода БХ при разделении достаточно сложных смесей является длительность анализа. Поэтому данный метод все чаще стараются заменить более экспрессным методом ТСХ, тем более что сейчас разработан высокоэффективный вариант ТСХ [16, 20]. Приведенные в издании методики по БХ, однако, представляют интерес для знакомства с методом распределительной хроматографии на бумаге. Кроме того, они дают информацию для переноса методик разделения тех же компонентов на колоночный вариант ЖХ.

ТСХ 1. Качественный анализ азокрасителей методом ТСХ   на незакрепленном слое сорбента

Приборы, реактивы, посуда

1.  Камера для хроматографарования.

2.  Сорбент – прокаленный оксид алюминия.

3.  Растворители – хлороформ и четыреххлористый углерод.

4.  Растворы азокрасителей (0,4 мг/мл) в хлороформе: Судан Ш, Судан желтый, п-аминоазобензол, Судан II, азобензол.

5.  Стеклянные пластинки  (10 × 20 см).

6.  Металлический валик для приготовления слоя сорбента.

7.  Стеклянные капилляры.

8.  Сухие стеклянные стаканчики.

Сущность работы