Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. Микроскопическое исследование, страница 9

Накожная (э п и к у т а н н а я) проба. На предварительно обработанную спиртом кожу спины или плеча наносится чистый кусочек марли или впитывающей бумаги в виде квадратика размером 1 X 1 см, смоченной в соответствующем растворе аллергена (используются разные разведения препарата). Сверху кусочек покрывают целлофаном (можно тонкой компрессной клеенкой или вощанкой) и закрепляют его липким пластырем. Результаты отмечают по снятии компресса через 48 и 72 часа после постановки реакции. Эритема, иногда с папулой, на месте нанесения аллергена указывает на различные степени положительной реакции. Контролем служит проба с кусочком марли или бумаги, смоченными в растворителе аллергена.

Следует заметить, что одни аллергические пробы, даже ярко положительные,  не  имеют диагностического значения,  так  как некоторые    из    них    носят    групповой    характер,    встречаются у больных и переболевших и даже хронических носителей соответствующих патогенных микробов. С другой стороны, при ряде глубоких микозов, как например  кокцидиоидный  микоз,  гистоплазмоз,   бластомикоз,   положительные   реакции   подтверждают микотическую  природу поражения,  иногда даже  подчеркивают этиологическое   значение   соответствующих   грибов,   но   решающего значения  в диагностике и здесь иметь не  могут.  Нужны другие, комплексные, клинико-лабораторные доказательства для точной   этиологической   диагностики   соответствующего   микоза.

ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Гистологическое исследование является ценным методом для характеристики воспалительных явлений в различных тканях и органах, для выявления своеобразия изменений при различных формах грибковых заболеваний и освещения деталей взаимоотношения тканей и паразита, представляющих существенный интерес в изучении динамики инфекционного процесса на разных этапах его развития.

Биопсия. Кусочек ткани необходимо брать из наиболее ярко выраженных очагов поражения, учитывая, конечно, функцию данного участка и задачу нанесения возможно минимальной травмы больному. Кожа на избранном месте обезжиривается бензином и очищается протиранием чистым спиртом.         Смазывание йодом и применение для обезболивания инъекций новокаина при поверхностной биопсии не рекомендуется: они нарушают картину строения исследуемой ткани. Применение для обезболивания хлорэтила заслуживает внимания. Кусочек кожи иссекают в пределах здоровой ткани, захватывая, если надо, подкожную клетчатку

Фиксация. Кусочек ткани фиксируют в чистом спирте или лучше в 10—20%-ном формалине. Для исследований, предусматривающих изучение микрофлоры, предпочитают фиксации ткани в спирте, для изучения более тонкого строения ткани — в формалине. Через несколько часов кусочек вынимают и фиксирующей жидкости, разрезают по длине на более тонки: (2—3   мм)   пластинки   и   снова   погружают    в    фиксирующую жидкость.

Срезы исследуемой ткани изготовляются на микротоме при помощи бритвы, установленной на минимальную толщину среза. Тонкие срезы снимаются с бритвы сухой, мягкой волосяной кисточкой и помещаются в тепловатую воду, где они расплавляются, затем выливаются на предметные стекла и наклеиваются. При изготовлении срезов из целлоидиновых кусочков поверхность их и нож все время должны быть во влажном состоянии,  для чего их кисточкой все время смачивают 70— 80°-ным спиртом.

Для более быстрого получения срезов прибегают к замораживанию кусочка углекислотой на специальном микротоме. Этот метод может быть еще более ускорен, если биопсированный кусочек будет подвергнут быстрой фиксации 20—25%-ным раствором формалина при осторожном подогревании (отнюдь не до кипения) в пробирке в течение 3—5 минут. Срезы с бритвы замораживающего микротома переносят в 95°-ный спирт, в котором и сохраняют для окраски.

Окраска срезов. Для окраски срезов предложены разнообразные методы.