РЕАКЦИЯ ТОРМОЖЕНИЯ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РТНГА)
Реакцию ставят для обнаружения антигенов возбудителей в исследуемом материале. При постановке РТНГА к этому материалу добавляют иммунную сыворотку. При наличии в исследуемом материале гомологичного антигена происходит связывание антител, поэтому после добавления сенсибилизированных антигеном эритроцитов на втором этапе не происходит их агглютинации, что оценивается как положительный результат. Для большей чувствительности реакции специфическую иммунную сыворотку добавляют к исследуемому материалу в минимальном количестве (2 гемагглютинирующие единицы). Титр иммунной сыворотки определяют предварительно в РНГА, за одну гемагглютинирующую единицу принимают предельное разведение сыворотки, которое вызывает склеивание эритроцитов.
РТНГА ставят также для обнаружения специфических антител (полных и блокирующих), для чего к исследуемой сыворотке добавляют дозированное количество антигена. Если в ней содержатся антитела, то происходит связывание их антигеном, поэтому после прибавления эритроцитов, сенсибилизированных антителами (2-й этап РТНГА), склеивания эритроцитов не происходит.
Использование минимального количества антигена (2 нейтрализующие дозы) способствует высокой чувствительности реакции. Количество нейтрализующих доз в антигенном препарате определяют в РНГА; при этом делают серийные двукратные разведения антигена в 1 % растворе НКС и в лунки вносят антительный эритроцитарный диагностикум. Нейтрализующей дозой антигена считают его максимальное разведение, дающее полное склеивание сенсибилизированных эритроцитов.
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ ЛАТЕКСА (РАЛ)
При постановке РАЛ используют частицы латекса, на которых адсорбирована иммунная сыворотка (или антиген грибов), благодаря чему они склеиваются в присутствии антигена (или антител во втором случае).
Реакцию ставят в абсолютно прозрачных преципитационных пробирках диаметром не более 8 мм (в узких пробирках быстрее происходит образование и оседание преципитата). В ряд пробирок вносят по 0,2 или 0,1 мл неразведенной исследуемой сыворотки. В отдельном ряду готовят серийные 2- или 5-кратные разведения антигена в изотоническом растворе хлорида натрия. В пробирки с сывороткой добавляют равный объем разведений антигена. Штатив встряхивают для перемешивания ингредиентов и ставят на 2 ч при 37°С, а затем на 5 сут при 4 °С. Контроли: исследуемой сыворотки (сыворотка + изотонический раствор), антигена (антиген + изотонический раствор), заведомо положительный (иммунная сыворотка + антиген).
Результат учитывают при боковом освещении пробирок на темном фоне: (+ + + +)—полное осаждение преципитата, (+ + + )—сильное, ( + +)—легкое, ( + )—едва заметное помутнение раствора, (—) жидкость прозрачна.
Недостатками пробирочной РП являются длительность сроков получения результата и необходимость использовать большое количество исследуемой сыворотки.
РЕАКЦИЯ ИММУНОДИФФУЗИИ (РИД)
Для постановки РИД наиболее часто используют 0,8—1 % гели агара или агарозы. Гели двойной концентрации разливают по пробиркам и хранят в холодильнике. Перед постановкой реакции их расплавляют и смешивают с равным объемом растворителей, взятых в двойной концентрации
При постановке РИД антигены и антитела движутся в геле навстречу друг другу. В том месте, где соотношение концентраций антигенов и антител становится оптимальным, образуются полосы преципитации. При избытке антигена или антител преципитат может не образовываться или даже снова раствориться (феномен прозоны). Поэтому при постановке РИД используют лунки разных размеров, а также изменяют расстояние между ними.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.