Слияние линий преципитации обеих сывороток свидетельствует, что контрольная и исследуемая сыворотки взаимодействуют с одним и тем же антигеном. Пересечение линии преципитации указывает на неидентичность антител контрольной и исследуемой сывороток. Если линии сливаются, но одна из них длиннее другой и продолжается в виде тонкой «шпоры», это показывает, что опытная и контрольная сыворотка выявляют одинаковые антигены. Однако одна из них (в нашем примере контрольная) содержит также антитела к другим антигенам, которые не вы являет испытуемая сыворотка. Антитела контрольной сыворотки и образуют дополнительную «шпору». Однако в зависимости от использованных ингредиентов и условий иммуно-диффузии могут возникать различные отклонения от указанной схемы. Полный анализ линий преципитации представлен в специальных руководствах.
При постановке РИД одна линия преципитации может быть образована при взаимодействии в одном участке геля как одной, так и нескольких пар антигенов и антител. Для более точного учета количества антигенов, реагирующих с сывороткой, используют иммуноэлектрофорез.
ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ (ИЭФ)
Вначале производят разделение антигенов в геле с помощью электрофореза, затем вдоль линии движения антигенов вырезают канавку и заполняют ее иммунной сывороткой. В тех местах геля, где встречаются в оптимальных концентрациях диффундирующие навстречу друг другу антиген и антитела, образуются линии преципитации.
ВСТРЕЧНЫЙ ИММУН0ЭЛЕКТР0Ф0РЕЗ (ВИЭФ)
Метод отличается тем, что антигены и антитела движутся навстречу друг другу в электрическом поле, благодаря чему быстро происходит их встреча и вскоре появляются линии преципитации. Метод ВИЭФ позволяет учесть результаты уже через 1 — 1,5 ч после постановки реакции, к тому же он чувствительнее, чем РИД.
НЕПРЯМАЯ РЕАКЦИЯ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ (НРИФ)
При инкубации исследуемых сывороток крови с антигеном, фиксированным на поверхности стекла, происходит связывание как полных, так и неполных антител. Затем препараты обрабатывают флюоресцирующими антиглобулиновыми сыворотками, которые соединяются с фиксированными на грибах антителами. Если исследуемые сыворотки содержали антитела к грибам, то при люминесцентной микроскопии наблюдается их свечение.
Для выявления специфической аллергии применяются следующие методы.
Внутрикожная проба. Ставится на коже предплечья, наружной поверхности плеча или даже на спине. Участок кожи предварительно протирают этиловым спиртом. Соответствующее разведение аллергена в объеме 0,1 мл вводят туберкулиновым шприцем внутрикожно. В качестве контроля делают инъекцию 0,1 мл того раствора, на котором приготовлен аллерген.
Кожная (эпидермальная) проба. Аллерген наносят на скарифицированную кожу предплечья или наружной поверхности плеча. Для этого кожу также протирают эфиром или этиловым спиртом, а затем физиологическим раствором, которому дают высохнуть.
На обезжиренные участки кожи наносятся пипеткой по одной капле различные разведения аллергена на расстоянии 2,5—3,75 см друг от друга. Через них оспопрививательным пером или лезвием ланцета делают очень поверхностные скарификации, стараясь при этом избежать появления крови. Одна царапина, расположенная дистально, служит контролем — она наносится через каплю растворителя аллергена.
Кожная проба считается менее чувствительной, чем внутри-кожная, но она дает несколько меньше неспецифических реакций.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.