Для обнаружения малого количества возбудителя в ногтевых или кожных чешуйках их помещают на дно обыкновенной пробирки, заливают 1,5-2 мл 20%-ной КОН, затем кипятят на водяной бане до полного растворения роговых масс (на что обычно требуется от 20 до 60 минут). Жидкость переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 10-15 минут. После этого быстро сливают верхнюю часть жидкости, а осадок исследуют на предметном стекле под микроскопом.
Особого внимания этот способ заслуживает при исследованиях ногтевых пластинок, клетки которых более плотны и труднее поддаются мацерации. Волосы ни в коем случае не должны подвергаться этой обработке: они при кипячении быстрее разрушаются, а элементы гриба теряют свои характерные особенности (расположение).
Изготовление окрашенных препаратов.
Окраска по Граму. На фиксированный препарат наливают через бумагу анилиновый или карболовый генцианвиолет на 1 минуту, раствор Люголя (без бумаги) - на 1 минуту, спирт - на 30 секунд. Препарат промывают водой и докрашивают водным фуксином в течение 1 минуты. При этом грамположительные клетки становятся фиолетовыми, а грамотрицательные - красными.
Окраска по Циль — Нильсену. На фиксированный препарат наливают через бумагу карболовый фуксин, красят препарат 2 минуты, подогревая до появления паров; обесцвечивают погружением в 10%-ную серную кислоту до слегка розоватого оттенка, после чего промывают водой и докрашивают водной синью в течение 3 минут.
Окраска по Романовскому — Гимза. Фиксированный спиртом препарат целиком погружается в водный раствор краски Романовского — Гимза (1—2 капли на 1 мл бидистиллированной воды); окрашивание производится в течение 30—60 минут, иногда дольше, в зависимости от густоты мазка и природы исследуемого материала.
После обычного промывания водой препарат подсушивают фильтровальной бумагой, а затем для полного удаления влаги подогревают высоко над пламенем спиртовой горелки, покрывают кедровым маслом и исследуют при помощи иммерсионной системы, как обычные окрашенные препараты.
Аналогичным методом, но только соответствующей краской окрашивают препараты по Райту, Лейшману, панхромом и др.
В мазках, окрашенных по Романовскому - Гимза, клетки дрожжеподобных грибов представляются розовато-фиолетовыми, хроматиновые включения - красными, волютин - темно-фиолетовым.
Для выявления слизистых капсул у дрожжей и дрожжеподбных организмов исследуемый материал осторожно, но равномерно смешивают с китайской тушью в капельке на предметном стекле, после чего смесь размазывают посредством шлифованного предметного или покровного стекла тонким слоем по всему предметному стеклу, подсушивают на воздухе, фиксируют обычным путем и окрашивают водным раствором генцианвиолета или фуксина. По Ланжерону и Герра, наиболее подходящей для окраски здесь дрожжевых клеток является нильский синий, так как все другие сорта обесцвечиваются китайской тушью.
Для окраски грибов в патологическом материале применяют щелочные растворы красителей, иногда с подогреванием (Ланжерон). Удачные результаты получаются от применения следующего реактива: равные по объему растворы 2-5%-ной едкой щелочи и 1%-ного водного раствора эозина или метиленового синего. В капельку этой смеси на предметном стекле вносятся небольшие комочки мокроты, гноя, осадка мочи или мелкие кусочки волосков, кожных и ногтевых чешуек. Препарат подогревается до появления кристаллического ободка по периферии капли, затем покрывается покровным стеклом и через 2-3 часа исследуется под микроскопом. Под воздействием едкой щелочи мацерируется и просветляется патологический материал, грибковые элементы окрашиваются в розовый или синеватый цвет, располагаясь на желтоватом фоне клеточных элементов.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.