Основные принципы и диагностические возможности проточной цитометрии в клинической иммунологии и эндокринологии, страница 14

Д.  Иммунофенотипический анализ в мониторинге минимальной резидуальной                         болезни

Говоря о возможностях иммунологической оценки излеченности больных лейкемиями, прежде всего следует остановится на так называемом феномене минимальной резидуальной болезни (MRD).

Современная химиотерапия острых  лейкозов позволяет достигать полной ремиссии у большинства пациентов. Однако отдаленные результаты терапии, представляемые различными исследователями в течение последнего десятилетия, свидетельствуют о том, что у определенного процента больных рано или поздно возникает рецидив заболевания [5]. Очевидно, определенное количество резидуальных лейкемических клеток, которые невозможно зарегистрировать с помощью стандартных методов световой микроскопии, присутствуют у этих больных в период ремиссии  и становятся, по-видимому источником рецидива. Этот феномен получил название минимальной остаточной болезни. Среди высокочувствительных методов, позволяющих выявить проявления MRD, одно из ведущих мест принадлежит проточной цитометрии.

Стратегия обнаружения минимальной резидуальной болезни при острых лейкозах базируется на описанном целым рядом исследователей феноменоме экспрессии на лейкозных бластах различных комбинаций дифференцировочных лейкоцитарных маркеров, которые в норме не выявляются на поверхности этих клеток как  в периферической крови, так и в костном мозге [17, 38]. Такие асинхронные лейкоз-ассоциированные фенотипы могут быть идентифицированы с помощью метода двойного-, тройного- или четырех-цветового окрашивания лимфоцитов в реакции c МКА, коньюгированными с различными флуохромами, с последующей регистрацией на проточном цитометре.

В работе D.Campana [18] представлены различные иммунофенотипические комбинации используемые для изучения MRD у пациентов с острыми лейкемиями. В случае В-линейных ОЛЛ в эти комбинации (табл.5) обычно всегда входят один или два маркера, позволяющие распознавать незрелые лимфоидные клетки, например CD10, CD19 или CD34. Кроме этих антигенов в комбинацию дополнительно должен быть включен один из маркеров, не экспрессирующийся на нормальных В-клеточных предшественниках, такие как, миелоид-ассоциированные антигены CD13, CD33, CDw65 или ассоциированный с натуральными киллерами антиген CD56.

Таблица 5

Иммунофенoтипические комбинацииСD-антигенов. используемые для изучения MRD у пациентов с острыми лейкозами [18]

* - более 10% позитивных лейкемических лимфобластов

В большинстве случаев Т-линейных ОЛЛ для диагностики MRD используют комбинированное окрашивание с анти-TdT и анти-CD3 антителами, коньюгированными с различными флуорохромами (см. табл.5).

Асинхронность экспрессии клеточных маркеров у больных ОМЛ была обнаружена целым рядом авторов [17, 28, 31]. В табл. 5 представлены наиболее часто встречаемые комбинации антигенов, помогающие в диагностике MRD у пациентов с ОМЛ. Так, например, сочетание маркеров CD34/CD56 с успехом используется для иммунофенотипического анализа MRD у детей с ОМЛ [23]. Указанный фенотип ассоциируется также с кариотипом t(+8;21); (q22;q22).

Группа других исследователей, подразделяет наличие аберрантной экспрессии антигенов при ОМЛ на следующие типы [36]:

·  Аберрантная экспрессия немиелоидных антигенов.

Обнаружение с помощью иммунофенотипирования коэкспрессии лимфоидных и миелоидных антигенов у больных с ОМЛ.

·  Асинхронная экспрессия миелоидных антигенов.