Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 4

6. Способ Бури (выявление капсул): на конец предметного стекла наносят каплю туши и петлю исследуемого материала. Смесь перемешивают петлей и готовят мазок вторым предметным стеклом как мазок из крови. Высушивают на воздухе и, не фиксируя, микроскопируют с иммерсионной системой. Фон препарата окрашен в темно-дьпмчатый цвет, микробные тела и капсулы не окрашиваются и остаются бесцветными (негативный способ).

7. Способ Боголепова (для выявления капсул): негативный метод, при котором используется 2% колларгол, техника приготовления препарата  аналогичная способу Бурри. Фон препарата окрашен в коричневый цвет, тела микробных клеток окрашены в коричневый цвет, а капсула – в виде светлого ободка вокруг микробной клетки.

8. Способ Гинса (для выявления капсул): 1) по способу Бурри готовят препарат; 2) фиксируют этиловым спиртом 15-20 мин, промы­вают препарат; 3) окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным 1:3 в течение 3-5 мин; 4) промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. На темном фоне препарата контрастно выделяется неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко-малинового цвета.

Таблица 3. Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов

9. Окраска спор методом Ожешко: на нефиксированный препарат наливают несколько капель 0,5% раствора соляной кислоты и подогревают 1-2 мин над спиртовкой до закипания, остатки кислоты сливают; 2) промывают водой, сушат на воздухе и фиксируют в пламени; 3) окрашивают  карболовым фуксином Циля с подогреванием до отхождения паров (3-5 мин); 4) обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение нескольких секунд и промывают водой; 5) докрашивают метиленовой синью 3-5 мин. Споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные тела бактерий в синий цвет.

10.  Окраска спор методом Ганзена (видоизмененный метод Циль-Нильсена): 1) фиксированный препарат окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием (подогревают на пламени спиртовки до  отхождения паров) и охлаждают в течение 2-3 минут, затем промывают водой; 2) обесцвечивают раствором серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор и тщательно промывают водой; 3) окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего 3-5 минут, промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсией. Споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

11. Окраска бактериального ядра: на предметном столе готовят мазок, высушивают на воздухе и фиксируют парами 2% раствора осмиевой кислоты в течение 2-3 минут. Далее мазок подвергают гидролизу в растворе соляной кислоты при 60°С 2-3 мин и немедленно промывают водой. Затем мазок заливают 1% раствором формалина на 1,5 мин и вновь промывают водой. Окрашивают 0,1-1% раствором основного фуксина 1-2 мин, промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На розовом фоне цитоплазмы выделяется нуклеоид, окрашенный в ярко-малиновый цвет.

12. Окраска стенки бактериальной клетки (метод Гутштейна): 1) препарат фиксируют над огнем и протравливают в течение 20-30 мин 5% раствором танина; 2) промывают в течение 60 сек и окрашивают карбол-фуксином 1-2 мин. Микробы окрашиваются в слабо красный цвет, а клеточная стенка – в интенсивно красный цвет.

13. «Раздавленная капля»: на середину предметного стекла нанести петлей каплю исследуемого материала, накрыть ее покровным стеклом. В капле не должно быть пузырьков, жидкость не должна выходить за края стекла. Микроскопируют с иммерсией при опущенном конденсоре. В поле зрения видны бактерии, которые, передвигаясь с помощью жгутиков, совершают круговые и вращательные движения, могут пересекать все поле зрения.

14. «Висячая капля»: используют специальные предметные стекла с углублением (лунка) в центре. Каплю исследуемого материала наносят на середину покровного стекла. Края лунки смазывают вазелином. Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем стекло осторожно переворачивают и капля свободно свисает в центре герметически замкнутой полости лунки. Микроскопируют с иммерсией, наблюдая подвижность клеток.