Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 10

Идентификация выделенной культуры. Идентификация микробов –  определение систематического поло­жения выделенной из материала культуры до вида и варианта. Первым условием надежности идентификации является безусловная чистота культуры. Для идентификации микробов используют комплекс признаков: морфологические (форма, размеры, наличие жгутиков, капсулы, спор, взаим­ного расположения в мазке), тинкториальные (отношение к окраске по Граму или другим методам), химические (соотношение гуанина+цитозина в молекуле ДНК), культуральные (питательные потребности, условия куль­тивирования, темп и характер роста на различных питательных средах), ферментативные (расщепление различных веществ с образованием про­межуточных и конечных продуктов), серологические (антигенная структура, специфичность), биологические (вирулентность для животных, токсигенность, аллергенность, влияние антибиотиков и др.).

         Пробирки с посевами вынимают из термостата, изучают характер роста на скошенном агаре, убеждаются, что в пробирках получен рост одной культуры, отмечают характер налета по цвету, прозрачности.

         Рост на скошенном агаре может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным. Чтобы убедиться в чистоте культуры из  культуры готовят  мазок и окрашивают по Граму.

Для биохимической дифференциации изучают способность бактерий сбраживать углеводы с образованием промежуточных и конечных продуктов, способность разлагать белки и окислительно-восстановительные ферменты.

Для изучения сахаролитических ферментов выделенные культуры засевают в пробирки с полужидкими средами, содержащими лактозу, глюкозу. На полужидкие среды посев делают уколом в глубину среды. При посеве уколом пробирку со средой держат под наклоном, вынимают проб­ку, обжигают край пробирки. Материал забирают стерильной петлей и прокалывают ею столбик питательной среды почти до дна.

Для определения протеолитических ферментов выделенную культуру засевают на пептонную воду или МПБ. Для этого в руку берут про­бирку с посевом ближе к себе, а пробирку со средой - дальше от себя. Обе пробирки открывают одномоментно, захватив их пробки мизинцем и краем ладони, обжигают края пробирок, прокаленной охлажденной петлей захватывают немного культуры и переносят во вторую пробирку, растирают в жидкой среде на стенке пробирки и смывают ее средой.

При посевах и пересевах внимание должно быть обращено на соблюдение правил стерильности, для того, чтобы не загрязнять свои посевы посторонней микрофлорой, а также не загрязнять окружающую среду. Пробирки маркируют и помещают в термостат для инкубирования
на сутки.

Четвертый этап

          Учет результатов. Заключение по исследованию.

          Учитывают результаты идентификации и по совокупности полученных данных, опираясь на классификацию и характеристику типовых штаммов, описанных в руководстве (определитель Берджи, 1994-1996 гг.), определяют вид выделенных культур.

          Выполненная работа оформляется в виде протокола по схеме:

Протокол исследования материала (задача № ………)

1-й день. Посев материала на пластинчатый агар петлей параллельными штрихами. Посев в термостат на сутки.

2-й день. Исследование колоний и их характеристика.

Таблица 6. Характеристика роста исследуемых культур

Признаки колоний

колония 1

колония 2

Макроскопические:

прозрачность

размер

форма

характер поверхности

цвет

Микроскопические:

характер  края

структура

Консистенция

Приготовление мазков из колоний, окраска по Граму

Колония 1

Колония 2

          Оставшуюся часть колонии пересевают на скошенный агар для выделения чистой культуры. Посевы на сутки в термостат при 37°С.

3-й день. Идентификация чистой культуры

          Характер роста на скошенном агаре

          Колония 1

          Колония 2

          Окраска по Граму, чистота культура

          Колония 1

          Колония 2

Посев культуры на среды с лактозой, глюкозой и МПБ. Посевы на сутки в термостат при 37°С.

4-й день. Учет результатов. Заключение по исследованию.

Таблица 7. Характеристика типовых штаммов, входящих в задачи.

Вид микробов

Ф

о

р

м

а

Окраска по Граму

К

а

п

с

у

л

а

Ж

г

у

т

и

к

и

С

п

о

р

а

Пестрый ряд

Л

а

к

т

о

з

а

Г

л

ю

к

о

з

а

МПБ

И

н

д

о

л

Се-

ро-

во-

до-

род

E. coli

пал

отр

-

+

-

КГ

КГ

+

-

S. aureus

кокк

пол

-

-

-

-

К

-

+

Kl. pneumoniae

пал

отр

+

-

-

КГ

КГ

-

-

B. cereus

пал

пол

-

+

+

-

К

-

+

Sarcina

кокк

пол

-

-

-

-

-

-

-

Таблица 8. Характеристика выделенных культур

Колония 1

Колония 2

Вид микроба колонии 1 ………………………………………………….

Вид микроба колонии 2 ………………………………………………….

Вывод: из исследуемого материала выделены культуры …………….

ЗАНЯТИЕ 8

ТЕМА: ФЕРМЕНТЫ. ФЕРМЕНТАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ БАКТЕРИЙ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ

План занятия

1.  Ферменты бактерий

2.  Изучение сахаролитических ферментов бактерий

3.  Изучение протеолитических ферментов бактерий

4.  Использование ферментативной активности бактерий для идентификации микроорганизмов

Цель занятия: Ознакомить студентов с характеристикой бактериальных ферментов, использованием их для идентификации возбудителя, а также в практической деятельности человека