Индол определяют несколькими
способами: а) способ Эрлиха. В пробирку с культурой добавляют 2-3 мл эфира, после
энергичного встряхивания добавляют несколько
капель реактива Эрлиха. В присутствии индола
наблюдается розовое окрашивание. б)
способ Мореля. Индол выявляют с помощью индикаторной бумажки,
смоченной насыщенным раствором щавелевой кислоты, в случае образования
индола нижняя часть бумажки через
несколько дней розовеет.
В состав "пестрого" ряда может входить молоко, при посеве на которое можно обнаружить как кислотообразование: при разложении молочного сахара лактозы образуется молочная кислота, которая вызывает денатурацию казеина и молоко створаживается, так и протеолитическое действие - сгусток казеина растворяется с образованием пептона, что придает молоку желтоватый цвет и молоко просветляется - пептонизация молока.
Изучение сахаролитических и протеолитических ферментов часто оказывается достаточным для определения вида, но в некоторых случаях возникает необходимость включать в изучение другие ферменты: каталазу, цитохромоксидазу, фосфотазу и др., редуцирующую способность.
Ферментативную активность бактерий можно изучить не только на средах Гисса, но и с помощью системы индикаторной бумажной (СИБ), которая состоит из бумажных дисков, пропитанных реактивами и высушенных. Эти диски опускают в пробирку с исследуемой культурой и уже через 3-4 часа инкубации в термостате судят о разложении реактивов по изменению цвета диска.
ЗАНЯТИЕ 9
ТЕМА: ДЫХАНИЕ БАКТЕРИЙ (БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОКИСЛЕНИЕ). МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
План занятия
1. Типы дыхания бактерий
2. Дыхательные ферменты
3. Методы культивирования анаэробов
4. Примеры бактерий облигатных анаэробов
5. Методы выделения чистых культур анаэробов
Цель занятия: Ознакомить студентов с методами культивирования анаэробных бактерий
Методические указания к демонстрации
Культивирование анаэробов требует специальных условий, т.к. эти микробы необходимо лишить доступа свободного кислорода. В питательные среды, используемые для посева анаэробов, добавляют вещества, которые поглощают кислород из среды и снижают его концентрацию: глюкозу 1-2%, аскорбиновую кислоту – 0,08%. Все питательные среды перед посевом регенерируют, т.е. кипятят на водяной бане не менее 15 минут и быстро охлаждают, удаляя, таким образом, воздух, содержащийся в среде. Среду после посева заливают слоем вазелинового или парафинового масла, чтобы предупредить доступ кислорода. Культивируют анаэробы в бескислородных условиях. Существует несколько способов удаления кислорода: механический, химический, биологический.
Механический способ
а) Удаление воздуха механическим путем. Удаление
воздуха
(а, следовательно, и кислорода) проводят в специальных приборах -
анаэростатах путем выкачивания. Этот прибор может быть заменен эксикатором.
б) Механическая защита
от кислорода воздуха. Делают посев по
методу
Вейон-Виньяля в пастеровских пипетках. Для посева в чашках
делают
посев по методу Перетца, для этого разведения исследуемого
материала в расплавленном
агаре выливают в чашки Петри, на дно которых положены на стеклянные палочки или
спички стерильные стеклянные
пластинки. Между дном чашки и стеклянной пластинкой образуется капиллярная
полость, куда расплавленный агар быстро затекает. Высота слоя агара под
стеклом 1-2 мм, в этом слое вырастают анаэробы, в то время как над стеклом растут аэробы.
в) Замена воздуха индифферентным газом. В этом случае в анаэростат после откачивания воздуха нагнетают азот или, присоединив анаэростат к аппарату Киппа, вытесняют воздух с кислородом образующимся водородом.
г) Наиболее
простой способ - посев уколом в высокий столбик
сахарного агара.
Химический способ
Основан на способности некоторых веществ (щелочной раствор пирогаллола, гидросульфит натрия), поглощать кислород из воздуха. Засеянные чашки, или пробирки помещаю в специальные аппараты: Аристовского, 0мелянского или микроанаэростат, эксикатор, туда же помещают поглощающие вещества в чашке Петри, аппарат плотно закрывают.
Биологический способ
Основан на совместном выращивании в чашке анаэробов и аэробов-метод Фортнера. После посева чашки закрывают, заливают парафином для герметичности. Выросшие аэробы используют кислород и создают бескислородные условия для роста анаэробов.
В некоторых случаях, когда не требуется низкого парциального давления кислорода, кислород из воздуха можно удалить, поместив в эксикатор горящую свечу.
Среды и аппаратура для культивирования анаэробов
Среда Китта-Тароцци – представляет собой питательный бульон с 0,5% глюкозы, в который погружены кусочки печени или мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин, быстро остужают до 45° С и засевают сразу же, после посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное вазелиновое масло, чтобы защитить посев от кислорода.
Анаэростат – прибор, служащий для создания и поддержания стабильно анаэробных условии. Промышленность изготовляет микроанаэростаты и макроанаэростаты.
Микроанаэростат – представляет собой толстостенный металлический стакан цилиндрической формы, который через вакуумную резиновую прокладку закрывают металлической крышкой. Но крышке расположены вакуумметр и патрубок для откачивания и нагнетания воздуха и газа. Крышку прижимают к краям стакана винтом с дугообразным хомутом.
Макроанаэростат – это водяной термостат, внутри которого вмонтирован анаэростат – толстостенный металлический котел цилиндрической формы, герметически закрывающийся крышкой со стеклом для наблюдения за ростом микробов. На верхней стенке анаэростата находятся вакуумметр и патрубок для откачивания воздуха. Рабочая камера имеет съемные полочки для чашек и пробирок. В макроанаэростате вакуум должен быть доведен до 3-10 мм ртутного столба.
Эксикатор – стеклянный толстостенный сосуд, закрывающийся крышкой, которую можно притереть к краям эксикатора. В крышке имеется патрубок с краном для откачивания или нагнетания воздуха.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.