Результати всіх цих спостережень мають виняткове значення, оскільки вони показують, що під дією лугів може відбуватися не тільки розкладання деяких амінокислот, але, що є більше серйозним, перетворення даної амінокислоти (або її залишку) в іншу. Якщо ця нова амінокислота має особливу структуру (наприклад, лантіонін, інфра), то легко встановити, що вона являє собою артефакт. Однак утворення гліцину, аланіну або орнітину є набагато більше небажаним, тому що воно може привести до помилкових висновків.
Розглянемо трипептид А, В, С. Неповний гідроліз його повинен привести до утворення пептидів А. В і В. С. Якщо з якої-небудь причини в процесі обробки будуть штучно утворюватися з В. А, С. У або С. А, то структуру трипептиду вже не можна буде точно встановити.
Гідроліз пептидного зв’язку теоретично є оборотним. Однак ця рівновага настільки далеко зміщена в праву сторону, що здійснити в помітному ступені синтез стає неможливим, принаймні при звичайних умовах хімічного гідролізу. Проте цілком можливо, що й у ході такого гідролізу за рахунок проміжного утворення дикетопіперазинів або інших циклічних пептидів виникають нові пептидні зв’язки.
А. В. « А : В « В. А
Наслідками цих можливих реакцій зневажати не можна особливо при проведенні робіт з розведеними кислотами при високій температурі. Наприклад, при 110° в 0,1 н. НС1 гли.вал частково перетворюється у вал.гли. У меншому ступені цього можна побоюватися у випадку звичайно застосовуваних концентрованих кислот і при роботі на холоді. Однак навіть і тут бажано впевнитися в повній відсутності змін. Пряму перевірку можна було б, наприклад, провести шляхом неповного гідролізу білка, що містить тільки один із залишків А. У гідролізаті в цьому випадку повинно перебувати не більше двох дипептидів із залишком А.
3. Солюбілізація
Диференціальна солюбілізація вимагає наявності двох рідких фаз, що не змішуються.
Солюбілізація є повною, коли уся сукупність білків розчиняється в розчиннику, використовуваному в рідкій фазі. Застосовується при відділенні сумарних білків від інших компонентів. Як правило, це розчинники, що містять десорбуючі агенти [сечовина, додецилсульфат натрію; оцтова кислота, транс-Нс1-буфер та ін.].
В інших випадках бажано проводити виділення груп білків вибірково. Тоді використають властивості розчинності цих груп: у воді або сольових розчинах - для альбумінів і глобулінів; у розведеному спирті - для проламінів; у кислому або лужному середовищі - для білків з найбільш вираженою структурою. Для проламінів і глютелінів нерідко використають 2-меркапто-етанол, що розриває дисульфідні зв'язки, додецилсульфат натрію, що розриває сукупність нековалентних зв'язків, а також етилендиамін, диоксан і т.д.
Однак слід зазначити, що методи виділення білків на основі солюбілізації застосовуються на перших стадіях і служать для аналізу груп білків із близькими властивостями.
Білки м'язової тканини можна розділити на розчинні у воді (білки саркоплазми), розчинні в сольових розчинах (білки міофібрил) і нерозчинні у водно-сольових розчинах, умовно називані білками строми. Водорозчинні саркоплазматичні білки включають міоген, міоглобін, міоальбумін та ін. До солерозчинних відносяться міофібрилярні білки: міозин, актин, актоміозин, тропоміозин, тропоніновый комплекс. Ці білки відіграють виключну роль у руховій функції м'язів, коли м'язове скорочення пов'язане з утворенням актоміозинового комплексу. Фракція строми включає білки, що входять до складу сарколеми й внутрішньом'язової сполучної тканини, а також білки ядер.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.