Основные принципы и диагностические возможности проточной цитометрии в клинической иммунологии и эндокринологии, страница 13

Рис. 3. Распределение по фазам клеточного цикла (по оси ординат – количество клеток)

·  Использование проточной ДНК-цитометрии для анализа распределения клеток по фазам клеточного цикла

При помощи проточной цитометрии выявлены корреляционные связи между количеством клеток в S-фазе и гистологическим типом НХЛ, при этом большее количество S-фазных клеток характерно для лимфом высокой степени злокачественности [15]. Основываясь на доле клеток в S-фазе, НХЛ подразделяют на субтипы с низкой, промежуточной и высокой степенью злокачественности (классификация Working Formulation). Замечено, что чем больше встречается клеток в S-фазе, тем неблагоприятнее прогноз заболевания и меньше продолжительность жизни пациентов [33]. Анализ изменений параметров клеточного цикла у онкогематологических больных при воздействии химиотерапевтических препаратов и лучевой терапии позволяет использовать метод проточной цитометрии для оценки эффективности лечения [4, 26].

·  Изучение плоидности ДНК иммунокомпетентных клеток

Предполагается, что анеуплоидные ДНК опухолевых клеток являются прогностически значимым параметром для оценки агрессивности и интенсивности течения онкологического процесса. Многие исследователи связывают несбалансированное количество ДНК со стадией заболевания [39], степенью дифференцировки клеток [22, 34], гистологическими особенностями новообразования [39], с продолжительностью жизни [34], вероятностью возникновения и длительностью ремиссии, наличием метастазов [22], со степенью злокачественности и исходом болезни. ДНК-цитометрия позволяет выявлять анеуплоидные опухолевые клетки вне зависимости от интенсивности их деления и в ряде случаев верифицировать заболевание (при НХЛ с высокой степенью злокачественностью они встречаются чаще). Выявление анеуплоидного пика можно использовать в качестве маркера для определения остаточной минимальной болезни в период ремиссии (метод позволяет быстро получить ответ о величине остаточной лейкозной популяции и ее изменениях). Отмечено, что при острых лейкозах, продолжительность ремиссии заболевания короче и рецидив наступает гораздо раньше у больных, у которых анеуплоидные клетки оставались в костном мозге в период гематологической ремиссии [4, 10].

На основе вышеперечисленного можно сформулировать несколько положений с определенной долей условности:

1.  ДНК-диплоидные или тетраплоидные опухоли имеют лучший прогноз, чем  ДНК- анеуплоидные;

2.  Увеличение количества клеток в S-фазе коррелирует  с появлением анеуплоидии и находится в прямой зависимости от этого параметра;

3.  Усиление пролиферативной активности клеток новообразования, наряду с качественными или количественными изменениями ДНК, свидетельствуют о проявлении злокачественных свойств.

·  Изучение параметров пролиферации клеток костного мозга и их стабильности при лейкозах и анемиях

Показатели пролиферативной активности клеточной системы могут играть решающее значение в оценке прогноза, длительности ремиссии, в выборе метода лечения, в оценке эффективности проводимой терапии и особенно в диагностике. гематологических и онкологических заболеваний [4, 8]. Изменение этих показателей позволяет проводить дифференциальную диагностику анемий разной этиологии [11]. Однако существует серьезное препятствие в исследовании некоторых опухолей (болезнь Ходжкина), заключающиеся в гетерогенности опухолевых клеток [8].

При ряде гематологических заболеваний (особенно при острых лейкозах в период обострения, при пернициозных и апластических анемиях) часто отмечается повышение соотношения S/(G₂+M). Предполагается, что это связано с нарушением процессов синтеза ДНК в клетках и остановкой в прохождении S-фазы в результате действия эндогенных (дефицит В₁₂ и фолиевой кислоты, действие ингибиторов пролиферации) и экзогенных (цитостатические агенты) факторов, действие которых на организм приводит к нарушению эффективности гемопоэза. Поэтому, предлагаемый цитометрический параметр S/(G₂+M), характеризующий митотический цикл, можно рассматривать в качестве одного из тестов, позволяющих выявить неэффективный гемопоэз [11].