Биохимия фактора IX и молекулярной биологии гемофилии B, страница 3

Profactor IX, включая propeptide и фактор IX последовательность, подвергается карбоксилированию в эндоплазматической сети. Profactor IX, даже в его полностью carboxylated форма и в отличие от фактора IX, не способен к закреплению с мембранными поверхностями. 51 Возможно, эта особенность предотвращает фактор IX, чтобы не повеситься трубку внутри ячейки, где высокие уровни ионов кальция в пределах эндоплазматической сети могли поддерживать фактор взаимодействие IX-мембранного. Profactor IX подвергается дополнительной пост-переводной обработке, включая disulfide формирование соединения и glycosylation, характеристика других выделяемых плазменных белков. Propeptide расщеплен как последний случай обработки. MLID83065193 MLID86287341 MLID86189947 7,52,53 Furin/PACE расщепляет пептидные связи на местообитании, смежном с последовательностью Arg -4:X:Arg -2:Arg -1, где X может быть любая аминокислота. MLID93231990 54 Бристоль и коллегы MLID93216710 55 используемых сайт-направленного мутагенеза, чтобы определить иерархию эффективности дробления данные различные соединенные аминокислоты в P1 и P2 положениях(позициях): Lys-Arg > Arg-Arg > Thr-Arg > Arg-Lys > Lys-Lys Е Lys-Thr. G-карбоксилирование предшествует propeptide дроблению. 51

Структура Фактора IX

Человеческий фактор IX - гликопротеид одиночной цепи, составленный из 415 аминокислот (рис. 107-4). MLID82272386 MLID83065193 MLID80056619 6,7,56 Это имеет молекулярную массу 56,000. MLID74051884 57,58

Propeptide

Propeptide направляет g-карбоксилирование profactor IX и затем расщеплен, чтобы выдать(уступить) фактор IX.,  propeptide включает amphipathic " спираль ", с гидрофобным и гидрофильным лицом. MLID92002030 59 местообитание признания карбоксилирования расположено непосредственным к этой спирали. Мутации в propeptide были зарегистрированы как причина некоторых форм гемофилии B. Diuguid и другие. MLID86287341 52 определил размер propeptide фактора IX анализом фактора мутанта IX, фактор IX Кембридж. Этот мутант имеет N-терминал распространение с 18 остатками из-за мутации Arg -1 к serine, устраняя propeptide дробление propeptidase с trypsin-подобной спецификой. Одновременно Согнутый - подмыльный щелок и другие. MLID86189947 53 оцененных фактор IX Оксфорд 3, фактор мутанта IX, в котором Arg -4 видоизменен к амиду альфа-аминоглутаровой кислоты; эта мутация также предотвращает propeptide дробление. MLID86189947 53 Подобных мутации были описаны: Фактор IX Сан Dimas (Arg -4 B Gln), MLID89291896 60 фактора IX Troed-Y-Rhiw (Arg -4 B Gln), MLID89335613 61 фактор IX Лондон -3 (Arg -4 B Gln), фактор IX Лондон -4 (Arg -4 B Gln), MLID89305505 62 фактор IX Malmo-6 (Arg -4 B Trp), MLID89305505 62 и фактор IX Kawachinagano (Arg -4 B Gln). MLID89335614 63 Каждый из этих мутантов характеризован полным отсутствием фактора IX деятельность и присутствие propeptide распространения с 18 остатками. Из этих нескольких белков учился, MLID86287341 MLID89291896 MLID88067772 52,60,64 имеется частичный дефект в g-карбоксилировании фактора IX. Из-за этого дефекта в g-карбоксилировании и из-за отказа(неудачи) propeptide дробления, эти profactor IX мутанты не может связывать с пузырьками фосфолипида, и при этом они не могут быть активизированы фактором XIa. Эти данные и отмеченная гомология последовательностей этой области в g-carboxyglutamic содержащих кислоте белках вели к предложению роли для propeptide в обозначении белковых предшественников, содержащих этот определенный propeptide для последующего g-карбоксилирования. MLID85298305 65 Использование сайт-специфичного мутагенеза и ксеногенной млекопитающей системы выражения, Jorgensen и другие. MLID87102866 MLID88033058 26,41 демонстрируемый, что проектируемый белком фактор IX недостаток propeptide с 18 остатками не был carboxylated в vivo. Точно так же точковые мутации в -16 (Phe B Ala) или -10 (Ala B Glu), оба положения(позиции), высоко сохраненные в propeptides витамина белки K-зависимых, запрещенное g-карбоксилирование. Эти демонстрируемые результаты, что propeptide содержит элемент признания, обозначили местообитание признания g-карбоксилирования, который сигналы для g-карбоксилирования витамина белки K-зависимых в течение печеночного биосинтеза.