Биохимия фактора IX и молекулярной биологии гемофилии B, страница 13

Из большей ценности был обнаружение нескольких полиморфизмов длины фрагмента рестрикции (RFLPs) в пределах фактора IX ген, который может использоваться для обнаружения носителя (рис. 107-10). Единственный(отдельный) полиморфизм в пределах фактора IX кодирование последовательности происходит в остатке 148, такой, что 65 % белой совокупности имеет треонина в том очаге(фокусе), и 35 % имеет alanine. MLID85190593 174 Этих полиморфизм может быть обнаружен, и immunochemically MLID85216587 175,176 и через исследования(зонды) олигонуклеотида. MLID85190593 174 Кроме того, пять intragenic полиморфизмы были описаны в пределах introns фактора IX ген. TaqI полиморфизм в нуклеотиде 11,111 найден в 35 % белой совокупности. MLID84119514 177 XmnI полиморфизм (G B C) в нуклеотиде 7,076 присутствует на 29 % X хромосом, в то время как DdeI/HinfI полиморфизм, следующий из стирания нуклеотидов от 5,505 до 5,554 найден в частоте 24 %. MLID85087905 178

Camerino и другие. MLID85287199 179 описал MspI полиморфизм около нуклеотида 16,000 появление к частоте 20 %, в то время как Сено и другие. 180 описал BamHI полиморфизм в нуклеотиде -587, с частотой 6 %. Кроме того, четыре полиморфизма были найдены, чтобы быть близко связанными с фактором IX ген. Mulligan и другие. MLID87192722 181 описал SstI RFLP в q26-q27 области(регионе) X хромосомы с частотой приблизительно 50 %. Два близко связался, TaqI полиморфизмы также были описаны. MLID84194100 MLID88131058 182,183 Winship и другие. MLID89180371 184 использовал реакцию цепи polymerase (PCR), чтобы разоблачить HhaI RFLP 8 КБ 3 ' к фактору IX ген, встречающийся в 48 % изучаемой совокупности.

Чтобы определять,является ли человек, ,  гемофилия B носитель, геномный DNA изолирована от потенциального носителя, пациент с гемофилией B, и обоими родителями потенциального носителя. Это DNA переварен с соответствующими ферментами ограничения, и переваренным DNA,  управляется на соответствующей матрице гелей. DNA передан(перемещен) нитроцеллюлозе, и Южное пятно выполнено, используя меченый фактор IX cDNA как исследование(зонд). Рестриктазные карты тогда сравнены, с целью поиска любых полиморфизмов, найденных в пациенте с гемофилией, но не в нормальном родителе. Та же самая процедура может использоваться на DNA, полученном amniocentesis, чтобы определить, будет ли зародыш гемофилии B носитель нормальным или воздействующийся мужчина, и будет ли женский зародыш нормальным или будет нести ген гемофилии.

С комбинацией этих полиморфизмов, предсказано, что статус носителя 89 % потенциальной совокупности носителя (среди белых) может быть определен с уверенностью 99.9 %. 163 должно быть подчеркнуто, что эти числа(фигуры) применяются только к белой совокупности, в том, кого наиболее обширное изучение RFLPS имело место. Ясно, что частота каждого полиморфизма изменяется с этнической изучаемой группой, такой, что полиморфизмы, в настоящее время нанятые(используемые) для диагноза в пределах белой совокупности являются неадекватными для определения статуса носителя или в Японском MLID87076978 185 или черных совокупности. MLID89277343 186

Определение(намерение) статуса носителя, использующего RFLPS может быть полезно в белых и некоторых других поселениях, которые хорошо изучились. Однако, даже в белой совокупности, некоторые пациенты не могут быть диагностированы с этими методами. Заявление(применение) PCR к обнаружению носителей гемофилии изменило(заменило) оценку пациентов с гемофилией B. С PCR, теперь возможно усилить определенный exons и затем к последовательности DNA, чтобы определить ненормальность, которая вела к гемофилии B. С этой информацией, тогда возможно определить, присутствует ли та мутация в геноме или потенциальных носителей или зародышей (или и) тех носителей и пациентов. Это устраняет проблему генетической рекомбинации что облака использование близко связанных полиморфизмов ограничения, чтобы определить присутствие или отсутствие гена мутанта. Кроме того, с использованием PCR, теперь становится возможно исполнить дородовое испытание или на ячейках, полученных amniocentesis или на относящихся к хориону villus образцах без того, чтобы иметь необходимость ждать на этих нескольких неделях требуемый, чтобы получить достаточно плодных ячеек, чтобы делать обзоры ограничения.