Антитела к кор Антигену вируса гепатита С (мышиные моноклональные), страница 6

В. Используйте новые наконечники для каждого нового нанесения, добавьте 100 мкл Калибратора, Контролей или образцов в необходимые лунки. Следите за тем, что бы клетки, фибриновые компоненты или другие примеси не попадали в лунки. Не допускайте попадания реагента, Калибратора или Контролей на планшету вне лунок, или на ее края.

6.  Проверяйте визуально наличие образца в микролунках. Разбавитель Образцов имеет зелёный цвет. При отсутствии образца в лунке не происходит изменение цвета Разбавителя Образцов с зелёного цвета на синий. В данном методе специально для контроля нанесения образца Разбавитель Образцов меняет цвет. Негативный калибратор и Положительный контроль - окрашенные реагенты. Если изменение цвета не произошло, необходимо заново провести тестирование с пробами, калибраторами и контролями.
7. При ручном проведении исследования покрывайте микропланшету защитной фольгой. Инкубируйте планшету при36⁰С - 38⁰С на ротационном шейкере со скоростью 85-90 движений в минуту. При использовании инкубатора ORTHO Shaker Incubator, следуйте указанным инструкциям производителя. Если вы не используете данный инкубатор, а какой-либо его эквивалент, пользуйтесь нижеприведенной формулой для подсчета количества вращений:

RPM= 601/Ö (r),

Где RPM – требуемое количество оборотов в минуту

R – радиус орбиты шейкера

Ö (r) – квадратный корень из радиуса

ВНИМАНИЕ: конечное определение RPM должно быть определено до начала проведения методики.

При использовании автоматических систем пользуйтесь инструкциями производителей приборов.

8. При необходимости заполните держатель для стрипов вручную. Используя специальный прибор для промывания и аспирации, проведите процедуру промывки 1-но кратным Моющим Буфером 5 раз.

ВНИМАНИЕ: Для достижения оптимальных условий при проведении процедуры промывки необходима сильная адгезия образцов к поверхности лунки микропланшеты. Следуйте нижеперечисленным пунктам для получения надежных результатов.

А. Полностью аспирируйте содержимое лунки после промывки Моющим Буфером. После нанесения Моющего Буфера перед аспирацией подождите примерно 20 секунд.

В. Проведите процедуру наполнения/аспирации четыре раза.

С. Аспирируйте содержимое микролунки полностью. Переверните планшету и сильно постучите ей по чистой поверхности, если необходимо удалить излишки Моющего Буфера.

9. Добавьте 200 мкл Конъюгата в каждую лунку, кроме 1А.
10. При ручном проведении процедуры, накройте планшету новой, неиспользованной фольгой. При использовании автоматического инкубатора для микропланшет следуйте рекомендациям производителя прибора. Инкубируйте образцы при 37⁰С±1⁰С в течение 30 мин ± 2 мин.
11. Заранее приготовьте достаточное количество Субстратного Буфера. Таблетки ОФД при этом должны полностью раствориться. Для этого используйте протокол ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ. Не готовьте количество Субстратного Буфера больше, чем понадобится.
12. После второй инкубации, промойте образцы, как это показано в п.8. данной инструкции.
13. Добавьте 200мкл Субстратного Буфера в каждую лунку, кроме 1А.
14. Инкубируйте образцы в темноте в течение 30 мин ± 2 мин.
15. Добавьте 50 мкл 4N серной кислоты (H₂SO₄) в каждую микролунку, кроме 1А. Для проверки правильности нанесения, кислота должна добавляться по каплям в строго установленном порядке. При необходимости, осторожно потрясите планшету или поместите ее в шейкер, для полного перемешивания компонентов реакционной смеси. Избегайте при этом расплескивания реагентов за края лунок. При использовании автоматического процессора, строго соблюдайте указаниям производителя прибора.
16. При необходимости, остатки Буфера могут быть удалены с краев планшеты путём протирания их салфеткой, смоченной водой. Влага убирается путем промывания краев планшеты салфеткой, смоченной водой, а затем вытирается насухо. Считывание планшеты проводят при длине волны 490 нм или 492 нм, при референсной длине волны 620 нм или 630 нм. Считывание бланка в лунке 1А следует проводить, как указано производителем прибора.