экстрагируют водой (альбумины), слабыми растворами нейтральных солей (глобулины), спиртом (проламины) и щелочными растворами (глютелины).
Для анализа берут образцы муки весом 20-25 г, насыпают муку в коническую колбу, заливают 4-кратным количеством воды, взбалтывают на механической мешалке в течение 1 часа и ставят в холодильник при температуре 00С на 15-18 часов.
После выдерживания в холодильнике раствор белка отделяют центрифугированием, жидкость над осадком сливают в большой стакан, оставшуюся массу гомогенизируют с 5-кратным количеством воды, наливают в коническую колбу и взбалтывают в течение 30-40 мин. После этого содержимое колбы вновь центрифугируют и раствор белков сливают в тот же стакан. Такую экстракцию водой с последующим центрифугированием повторяют 4-5 раз до исчезновения реакции на белок с реактивом Фолина.
После полной экстракции водорастворимых белков остающуюся массу количественно переносят в коническую колбу, заливают 3-4-кратным объемом 1 М KCl и оставляют в холодильнике.
При обработке водой в раствор переходят не только белки, но и другие растворимые в воде соединения, в том числе свободные аминокислоты, сахара, минеральные соли, и полученный экстракт можно рассматривать как слабосолевой раствор. В такой раствор могут переходить не только водорастворимые белки альбумины, но и значительная часть солерастворимых белков – глобулинов. Поэтому для того чтобы отделить альбумины от глобулинов, необходимо проводить диализ экстракта против дистиллированной воды.
Для диализа используют полупроницаемые материалы, чаще всего целлофан. Диализ проводят в специальных приборах – диализаторах. В сосуд диализатора наливают воду, а в целлофановый мешочек внутри диализатора – полученный раствор. Через диализатор в течение суток пропускают медленный ток водопроводной воды. Через сутки водопроводную воду в диализаторе заменяют дистиллированной и продолжают диализ еще 10-12 часов. В процессе диализа низкомолекулярные вещества, в том числе и минеральные соли, выходят из целлофанового мешочка и вымываются водой, а внутри мешочка остаются только белки. Так как к концу диализа раствор в мешочке не содержит солей, солерастворимые белки выпадают в осадок, а в растворе остаются только альбумины.
Для отделения альбуминов от солерастворимых белков содержимое мешочка вместе с осадком переносят в центрифужные пробирки, мешочек споласкивают 2-3 раза водой, которую также выливают в те же пробирки, и растворимые белки отделяют от нерастворимых центрифугированием в течение 5-10 мин при 3-4 тыс. об/мин. Жидкость над осадком сливают в мерную колбу объемом 0,5 или 1 л, а осадок в центрифужных пробирках 2-3 раза промывают водой с последующим центрифугированием. Промывные воды сливают в мерную колбу. Раствор альбуминов в колбе доводят водой до метки и ставят в холодильник.
Осадок глобулинов в центрифужных пробирках растворяют в небольшом объеме 1 М KCl и переносят раствор в мерную колбу на 200-250 мл. Пробирки споласкивают 2-3 раза небольшими порциями хлористого
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.
