Тетрадь для лабораторных работ по спецкурсу "Экспериментальная иммунология", страница 9

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 8

дата

Серологический метод: реакция пассивной (непрямой) агглютинации. Диагностические возможности реакции пассивной агглютинации. Способы постановки. Учет результатов. Области применения

Методический материал

Другой вариант серологических реакций, получивших широкое распространение, называется реакцией пассивной (непрямой) агглютинации. Само название реакции означает, что феномен агглютинации формируется при участии вспомогательных частиц, т.е. пассивно или непрямым способом. Реакция пассивной (непрямой) агглютинации проводится для регистрации взаимодействия антиген-антитело в том случае, когда антиген водорастворим и при его связывании со специфическими антителами не происходит образования крупных видимых глазом агломератов. Но если такой водорастворимый антиген неспецифически сорбировать на каких-либо частицах, то проводимая реакция приобретает все характерные для реакции агглютинации черты. Чаще всего для постановки РПА (РНА) применяют эритроциты барана или частицы латекса диаметром 3-5 мкм. При использовании эритроцитов барана в качестве носителя диагностического компонента реакцию называют реакцией пассивной гемааглютинации или реакцией непрямой гемагглютинации - РПГА или, соответственно, РНГА. При использовании частиц латекса реакцию пассивной агглютинации называют реакцией латекс агглютинации - РЛА

Основные области применения РПА : определение эффективности поствакцинального иммунитета (определение уровня специфических антител после вакцинации), диагностика инфекционных болезней (определение титра антител или присутствия в биологических средах пациента антигенов микроорганизма, являющегося причиной заболевания), диагностика аутоиммунных заболеваний (например, определение ревматоидного фактора).

Компоненты РПА: 1) диагностический компонент. Диагностикум, представляющий собой антиген, сорбированный на эритроцитах барана, в этом случае называется эритроцитарным диагностикумом. А если для сорбции антигена используют частицы латекса, то диагностикум называют латексным. В случае определения антигена по известным антителам на частицах (эритроцитах или латексе) необходимо сорбировать диагностические антитела, тогда диагностическая сыворотка называется  эритроцитарным (латексным) антительным диагностикумом;

                             2) исследуемый материал - сыворотка крови пациента при диагностике инфекционных или аутоиммунных заболеваний или сыворотка крови лабораторного животного при постановке биологического/иммунологического эксперимента;

                             3) раствор электролита в качестве среды для разведения ингредиентов реакции и в качестве среды для постановки реакции. Обычно используют 0,15 М (0,85%) раствор хлорида натрия, реже - другие прописи.

Лабораторная посуда и необходимое оборудование. Как правило для постановки РПА необходимы то же оборудование, что и для постановки РА.

Схема постановки и учета РПА аналогичны  РА.

Задание

Протокол

1. Поставьте РПГА из предложенных реактивов. Зарисуйте механизм РПГА, схему реакции, проведите учет результата

2. Определите нарастание титра антител в РПГА. Сделайте вывод о диагностическом значении результатов. Зарисуйте результаты.