Выделение и идентификация чистой культуры микроорганизмов

Министерство образования и науки

Российской Федерации

Новосибирский Государственный Университет

Факультет естественных наук

Кафедра: Молекулярной биологии

Отчётная работа

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

 ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ

Ри Максим Тексенович

Научный руководитель

К.б.н. Ильичёва Татьяна Николаевна

Новосибирск – 2006

Цель работы:

1. Выделить и идентифицировать чистую  культуру;
2. Овладеть минимальными методами работы с культурой микроорганизмов.

Ход работы:

1. Посев культуры;
2. Выделить чистую культуру;
3. Описать культурные свойства выделенной культуры;
4. Описать морфологические характеристики;
5. Провести физиолого-биохимические тесты;
6. Идентификация.

9.03.2006 (четверг)

1. Посев культуры.

• Источник микроорганизмов (№17) в физиологическом растворебыл предоставлен Колесовой Н.Д. (к.317 НГУ), в объеме 5 мл.
• Стеклянную пипетку (рис. №1) достаем из пенала (рис. №2), опускаем в пробирку с микроорганизмами; отбираем пробу (V=2-3 мл) и опускаем её в пробирку с питательной средой - 1% молоко (V=5мл) и выдуваем. При этом в пробирке с молоком и с физиологическим раствором не касаемся их стенок. Вся работа производиться в радиусе 15 см, от горящей спиртовки, необходимое условие стерильности. Также открывая пенал и крышки пробирок, необходимо обжигать (t=1-2 сек) над пламенем спиртовки (1-2 см).
• Помешаем пробирку с питательной средой и микроорганизмами в термостат (Т=36ºC) на 7 дней.

16.03.2006 (четверг)

·  Достаем из термостата пробирку и смотрим на то, что получилось, наблюдаю жидкую мутную фазу и густую белую фазу (рис. №3). Произошло скисание молока (сбраживание), следовательно, есть рост бактерии и получена накопительная культура.

2. Выделение чистой культуры.

• Выделяю чистую культуру, с которой в дальнейшем я буду работать. Для этого берем чашку Петри (№1) с твердой агаризованной средой, мысленно делим дно чашки на 4 сектора (рис. №4) и подписываем 1,2,3,4.
• Микробиологическую петлю прокаливаем над спиртовкой и охлаждаем о внутреннюю поверхность пробирки с бактериями (прикасаемся), вносим в жидкость, касаемся густой белой фазы, вынимаем, и в секторе 1 проводим штрих, при этом не царапаю агар (рис. №5). Угол наклона к столу равен 20º.
• Пробирка с её содержанием нам уже не нужна.
• Далее прокаливаем петлю над спиртовкой  и охлаждаем  о внутреннюю поверхность крышки чашки Петри и перечеркиваем штрих и ведем линию во 2 сектор и делаем там новый штрих (рис. №6)
• Аналогично для 3 и 4 штриха (рис. №7). Вся работа производиться в радиусе 15 см, от горящей спиртовки, необходимое условие стерильности.
• Далее помешаем чашку Петри (№1) в термостат (Т=36ºC) на 7 дней, а пробирку в шкаф с комнатной температурой. При этом чашку Петри(№1) помещаем крышкой вниз, чтобы испарившиеся жидкость не попала на культуру.

23.03.2006 (четверг)

·  Достаем из термостата чашку Петри (№1) и смотрим на то, что получилось, наблюдаю (рис. №8) рост 10 колоний в виде округлых форм разного размера бежевого цвета на разных участках штрихов.

·  Микробиологическую петлю прокаливаем над спиртовкой и охлаждаем о внутреннюю поверхность крышки чашку Петри (№1) (прикосновением). Дотрагиваемся до одной из колоний и проводим штрих, в новой чашке Петри на чистом агаре, при этом не царапаю агар. Угол наклона к столу равен 20º. Вся работа производиться в радиусе 15 см, от горящей спиртовки, необходимое условие стерильности.

·  Далее помешаем чашку Петри (№2) в термостат (Т=36ºC) на 7 дней. При этом чашку Петри (№2) помещаем крышкой вниз, чтобы испарившиеся жидкость не попала на культуру.

3. Описать культурные свойства выделенной культуры.

• Работаю с чашкой Петри (№1); с той колонией, до которой дотронулись микробиологической петлей. Описываю визуально морфологические характеристики:

Признаки	Описание признака	Рисунок
Диаметр	1,9 мм
Профиль колонии	выпуклый
Форма колонии	неправильная
Край колонии	волнистый
Поверхность колонии	шероховатая
Структура колонии	однородная

30.03.2006 (четверг)

·  Достаем из термостата чашку Петри (№2) и смотрим на то, что получилось, наблюдаю (рис. №9) однородный рост колонии бежевого цвета вдоль штриха. Следовательно, культура чистая.