Биология \ Микробиология

Выделение и идентификация чистой культуры микроорганизмов, страница 2

  1. Описание морфологических характеристик.
    • Для того чтобы описать морфологию, провел микроскопический контроль: во-первых, провел окраску по Граму.
    • Окраска по Граму (рис. №10). На обезжиренноепрепаровальное стекло наносим три капли в три разные зоны. Микробиологической петлёй прокаленной над спиртовкой и охлажденной о внутреннюю поверхность крышки чашки Петри (№2) (прикосновением), касаемся чистой культуры и делаем мазки в центральной капле. Аналогичную процедуру проводим с двумя другими каплями, но вместо исследуемой культуры используем свидетелей (заранее известно, что одна культура Gm+, а другаяGm-). Далее высушиваем мазки над пламенем спиртовки (10-15 см), а затем препаровальное стекло проводим 2-3 раза в центре пламени, для того чтобы зафиксировать культуры. Далее на три культуры помешаем бумажку Синёва фиолетового цвета и смачиваем кристалвиалетом и ждём 1-3 минуты. Затем снимаем бумажку, а фильтровальной бумажкой убираем избыток красителя. На три культуры капаем раствор Люголя, после 1-2 минут промываем всёдистиллированной водой. Наблюдаю темную окраску культур. Далее капаем этиловый спирт (96%) желтого цвета, и ждем пока не обесцветиться Gm- культура. Затем промываем дистиллированной водой. Далее высушиваем и исследуем под микроскопом (x90) с иммерсионным маслом. Данным методом было показано, что исследуемая культура Gm+.
    • Во-вторых, форма палочковидная (прямые палочки) (рис. №11).
    • Взаиморасположение поодиночке или в парах.

4.04.2006 (вторник)

·  Для того чтобы сузить круг определения, как семейства, рода, так и вида, провожу 3 физиолого-биохимических теста.

  1. Физиолого-биохимические тесты.
    • Тест на каталазу. На покровное стекло капаю 2 капли Н2О2 в 2 разные зоны. Микробиологической петлёй прокаленной над спиртовкой и охлажденной о внутреннюю поверхность крышки чашки Петри (№2) (прикосновением), касаемся чистой культуры, а затем одной капли Н2О2, ничего не происходит. Аналогично проделываем с одним из свидетелей (культура Gm+). Наблюдаю пузырьки. В результате чего исследуемая культура не обладает каталазной активностью. Тест на каталазу отрицательный.
    • Тест на дыхание. В столбик агара (6-7 мл) на микробиологической петле вносим (до середины) исследуемую культуру, соблюдая все правила стерильности. И помещаем  этот столбик в термостат (Т=36ºC) на 2 дня.
    • Тест на пастеризацию. Так как споры обладают высокой термоустойчивостью и после пастеризации остаются жизнеспособными, то если исследуемая культура даст рост после пастеризации, значит, она обладает спорами. Из чашки Петри (№2) микробиологической петлей берем пробу, которую опускаем в пробирку с физиологическим раствором (V=0,5-1 мл). Для теста помимо исследуемой культуры взяли контрольную группу (№34, о которой заранее известно, что она спорообразующая). Пробирку с контрольной группой приготовила (V=0,5-1 мл физиологического раствора + культура (много)) преп. к.б.н. Ильичёва Т.Н. для всей группы. Далее помещаем опыт, и контроль на водяную баню (t = 15 мин (после того как покажет термометр), T = 75ºC). Далее чашку Петри (№3) делим на 4 зоны (рис. №13) и с помощью пипетки капаем (2-3 капли) суспензии, как до пастеризации, так и после. Помещаем  эту чашку в термостат (Т=36ºC) на 2 дня.

6.04.2006 (четверг)

·  Анализирую 2 теста проделанные 2 дня назад.

·  Тест на дыхание. В столбике агара, наблюдаю белые хлопья (рис. №12), которые расположились конусообразно. Вывод, исследуемая культура факультативные анаэробы.

·  Тест на пастеризацию. После пастеризации во всех 4-х секторах чашки Петри (№3) выросли культуры. Делаю окраску по Граму исследуемой культуры до и после пастеризации. Наблюдаю одну и туже картину, а именно палочковидные формы бактерий, Gm+. Следовательно, исследуемая культура спорообразующая.

·  На основании этих тестов можно выделить несколько, родов и видов:

·  Сем. Bacillaceae

1.  Род. Bacillus

·  B. Stearothermophillus (c.291 {2})

·  B. Larvae (c.293 {2})

·  B. Popilliae (c.293 {2})

·  B. Lentimorbus (c.293 {2})

2.  Sporolactobacillus

·  S. Inulinus (c.289 {2})

3.  Clostridium (c.289 {2})

·  Проделываем другие тесты, которые позволят более точно определить род и вид.

·  Тест на температуру. Из чашки Петри (№2) пересеваем культуру в 2 другие чашки Петри (№4 и №5) и ставим их соответственно в термостат (T = 45ºC) и в холодильник (T = 15ºC) на 7 дней.

Скачать файл