Общая методика и основные методы исследования токсико-аллергических заболеваний, страница 4

Для выделения чистой культуры лимфоцитов использовали метод разделения лимфоцитов в градиенте плотности фиколл - верографин по Jondal М. /1968/. Количество Т-лимфоцитов в периферической крови определяли по методу Jondal М. /1972/, основанному на выявлении способности мембран Т-лимфоцитов непосредственно связывать эритроциты барана и образовывать спонтанные /Е- или Т-/ розетки, что называется реакцией спонтанного розеткообразования /Reinhers Е., 1974/.

Более полное представление о состоянии клеточного иммунитета можно получить путем изучения отдельных субпопуляций лимфоцитов, среди которых особый интерес представляют хелперы и супрессоры.

Наиболее современным методом определения субпопуляций является метод идентификации их с помощью моноклональных антител /Reinherz Е., 1979/, однако отсутствие моноспецифических сывороток затрудняет его широкое использование. В связи с этим нередко используется метод Moretta Z. /1975/, с помощью которого выявляют рецепторы к F_c-фрагменту иммуноглобулинов М и G/ - определяют Т_м и Т_g - розеткообразующие клетки. Однако и этот метод отличается трудоемкостью, необходимостью использования дефицитных реактивов, в связи с чем практически не используется в клиниках. Более популярным стал метод Limatibul S. /1978/, в основе которого лежит разная чувствительность рецепторов разных субпопуляций Т-лимфоцитов к теофиллину. При этом все Т-лимфоциты делятся на теофиллин-чувствительные /ТФЧ - клетки/, утрачивающие после инкубации с теофиллином способность розеткообразования с эритроцитами барана, и сохраняющие способность к розеткообразованию /теофиллинрезистентные - ТФР-клетки/. В группу теофиллинчувствительных клеток входят преимущественно Т-клетки с F_c-рецепторами к иммуноглобулину G, оказывающие супрессивное влияние на В-лимфоциты. ТФР-клетки, в основном, включают Т-лимфоциты, несущие на поверхностиF_c-рецепторы к иммуноглобулину М и обладающие хелперной активностью. Доказана высокая корреляция между Т_м и ТФР-лимфоцитами и Т_g и ТФЧ-клетками /Pichler et al., 1978; Shore A., et al., 1978/, что позволили широко использовать его из-за простоты и отсутствия потребности в дефицитных реактивах для суждения о соотношении супрессорной и хелперной субпопуляции Т-лимфоцитов.

Наряду с определением ТФЧ и ТФР-лимфоцитов определяли содержание Т-активных лимфоцитов. Использовали метод розеткообразования. Эти лимфоциты, являясь наиболее молодыми формами общей популяции Т-лимфоцитов, играют значительную роль в иммунном ответе организма при воспалительных заболеваниях /Новиков Л. К., 1987/.

Состояние гуморального звена иммунитета оценивали по содержанию в периферической крови В-лимфоцитов и иммуноглобулинов А, М и G, а у некоторых групп больных - и циркулирующих иммунных комплексов.

О содержании В-лимфоцитов в периферической крови судили методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши, предложенным Stathopulos et. al., /1974/. О функции В-лимфоцитов судили по концентрации в периферической крови иммуноглобулинов классов А, М и G. Разделение иммуноглобулинов на классы проводили методом радиальной иммунодиффузии по Манчини /1965/. Метод основан на диффузии антигена из лунки агарового геля и его преципитации в агаре с образованием полос за счет содержания в геле антител, которыми являются моноспецифические антисыворотки против различных классов иммуноглобулинов человека.