Системные микозы. Основные методы лабораторной диагностики кандидозов и аспергиллезов: Методическая разработка для проведения практических занятий по клинической микробиологии, страница 7

Так как грибы рода Candida сапрофитируют на слизистых оболочках полости рта, верхних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, диагноз кандидоза устанавливается с учетом количественных критериев содержания Candida в патологическом материале. В норме у здорового человека грибы Candida могут присутствовать в смывах с полости рта, гениталий, содержимом желудка -до 102 КОЕ/мл, в мокроте, носоглоточной слизи - до 103 КОЕ/мл, в кале - до ID4 КОЕ/мл. А в стерильных жидкостях организма (крови, ликворе, содержимом желудочков мозга, желчи, синовиальной суставной жидкости, соке простаты, моче и т.д.) грибы отсутствуют.

Для быстрой идентификации C.albicans исследуемую колонию пересевают в сыворотку крови, в которой этот вид через 2-3 часа при инкубации при 37°С образует ростковые трубки и псевдомицелий.

В настоящее время существуют хромогенные среды и тест-системы, значительно облегчающие работу микробиолога по идентификации дрожжеподобных грибов. Хромогенные среды («CandiSelect» и «Albicans ID») используют для выделения первичной культуры с одновременым определением видов Candida. Тест-системы («Fongiscreen 4H», «Auxacolor», «BBL Mycotube») позволяют быстро, за 4 часа или в течение 2-3 суток, идентифицировать распространенные виды Candida. При необходимости проводят расширенное изучение ферментативной и ассимиляционной способности гриба по стандартным методикам.

Ферментативная активность видов Candida

Среда Гисса

Пептон                                  10 г

NaCl                                        5 г

Индикатор Андреде             10 мл

Углевод                               20 г

Вода                                     1 л

Разливают по 5-10 мл в пробирки с поплавками и стерилизуют при 110°С 20 мин.

Засевают культурой дрожжеподобных грибов с плотной питательной среды и инкубируют при 27-30 °С до 7 дней.

О наличии ферментации углевода исследуемой культурой свидетельствует изменение рН среды и образование газа (поплавок всплывает на поверхность).

Диски диаметром 5 мм вырезают из фильтровальной бумаги, размещают по стеклу, капают сверху насыщенным раствором углевода. Убирают излишек раствора и высушивают диски при 37°С.

Ассимиляционная активность видов Candida

Дрожжевая азотная основа

КН2Р04                                                       

MgS04                                                       0,5г

NH4S04                                                      

Агар                                    25г

Вода дистил.                      1л

Плесневые возбудители системных микозов

Тактика выявления плесневых возбудителей идентична исследованиям патологического материала при подозрении на аспергиллез (схема 2). Описание гифомицетов в разделе 3.3.1.2.

Характеристика наиболее распространенных родов зигомиц-тов.

Absidia. Колонии пушистые, вначале белые, затем серые. Часто образует столоны (толстые воздушные гифы). Спорангиеносцы, до 250 мкм длиной, отходят по нескольку от верхушки дуги столона. Спорангии обратногрушевидные - 40-60 мкм с конической апофизой (колонкой) от 50 до 100 мкм в диаметре. Споры шаровидные или эллиптические, бесцветные, гладкие или шероховатые.

Мисог. Колонии гладкие, бархатистые, серые, спорангиеносцы одиночные, прямостоящие, с 1-2 ветвями, отходящими почти под прямым углом, 180-400 мкм высотой. Спорангии с апофизой, темно-серые или буроватые, до 60 мкм в диаметре. Колонка (продолжение верхушки спорангиеносца в полости спорангия) шаровидно-грушевидная, дымчатая. Споры 3-5 мкм в диаметре.

Rhizopus. Воздушный мицелий обильный серовато-белого цвета, шерстистый, затем желтовато-коричневый или коричневый. Спорангиеносцы темные, не ветвящиеся, 100-200 мкм в длину, одиночные или группами с хорошо развитыми ризоидами (корневидными выростами). Часто хорошо развиты столоны. Спорангии с коричневыми или черными стенками, содержат округлые споры.

Выделение и определение грибов рода Aspergillus

Тактика выявления возбудителей приведена в схеме 2.