При мицетомах верхних и нижних конечностей гной, взятый из глубины пораженных участков и свищевых ходов исследуют на наличие «зернышек» (друз) размером до 2 мм. Для этого материал смешивают с небольшим количеством физиологического раствора в чашке Петри и просматривают под лупой. Обнаруженные друзы или гной микроскопируют в КОН/ДМСО и окрашивают по Граму и Романовскому для диф-ференцильной диагностики актиномицетомы (возбудители - актиноми-цеты) и эумицетомы (возбудители - плесневые грибы).
Друзы актиномицетов представлены плотным сплетением мицелия в центре, образующим лучистость на периферии. Нередко на концах лучистого мицелия образуются колбообразные вздутия. В мазках, окрашенных по Граму, видны грамположительные мицелиальные или полиморфные кокковидные или палочковидные клетки диаметром 1-2 мкм, располагающиеся небольшими скоплениями. В случаях эумицетомы в нативном препарате хорошо видны широкие септированные гифы плесневого мицелия, при окраске гифы окрашиваются слабо и могут сливаться с окружающим фоном.
Из кусочков ткани приготавливают гистологические препараты. Наиболее часто употребляемые общеизвестные методы окраски гистологических препаратов, такие как окраска по Романовскому - Гимзе, по Граму (в различных модификациях), окраска гематоксилин-эозином и т.п. выявляют реакцию тканей, часто не выделяя грибы. При таких окрасках молодые грамположительные клетки грибов принимают синий цвет, однако старые и фагоцитированные клетки, а также мицелий плесневых грибов окрашиваются слабо. Для лучшего выявления грибов в секционном материале рекомендуют специальные методы окраски: по Гомори-Грокотту, при которой грибы принимают коричневато-черную окраску на бледно-зеленом фоне; PAS - грибы приобретают цвет от розового до пурпурного, фон - бледно-зеленый; по Гридли - возбудители окрашиваются в темно-розовый или пурпурный цвет, фон - желтый. Окраска му-цикармином по Мейеру позволяет дифференцировать криптококки от других грибов сходных размеров и форм, капсула принимает красный цвет, фон - желтый.
Для постановки диагноза грибкового инфицирования достаточно обнаружения в тканях единичных грибковых клеток. В большинстве случаев в гистологических срезах не удается определить родовую принадлежность возбудителей, за исключением нескольких, имеющих характерные морфологические черты. Почкующиеся дрожжеподобные клетки и псевдомицелий характеризуют грибы рода Candida, округлые дрожжеподобные клетки, окруженные широкой неокрашенной зоной - Cryptococcus neoformans, дихотомически ветвящийся мицелий - грибы рода Aspergillus, полиморфные, сигаровидные и веретенообразные клетки - Sporothrix schenckii. Возбудители хромомикоза при окраске гематоксилин-эозином проявляются в тканях буроватыми «склеротическими тельцами» с толстой двухконтурной оболочкой и продольно-поперечными складками. При окраске по Грокотту «склеротические тельца» окрашиваются в черный цвет, в этих случаях их нельзя отдифференцировать от других дрожжепо-добных возбудителей.
Культуральные исследования.
Кровь
5-10 мл крови засевают в десятикратный объем жидкой среды Сабуро, культуру крови (бульон) или сердечно-мозговую двухфазную среду. При посеве крови в среду накопления (жидкая среда Сабуро) на 2, 5 и 7 дни делают контрольный высев осадка на чашки с агаром Сабуро, которые выдерживают в термостате 2-5 суток. Использование двухфазной среды значительно увеличивает процент выявления грибов и сокращает время инкубации. При посеве крови в двухфазную среду необходимо следить, чтобы бульон с кровью покрывал поверхность агара. При обнаружении роста колоний на агаре флакон располагают вертикально.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.