Системные микозы. Основные методы лабораторной диагностики кандидозов и аспергиллезов: Методическая разработка для проведения практических занятий по клинической микробиологии, страница 3

Патологический материал разрезают стерильным скальпелем на фрагменты диаметром 0,5-1 мм. Большие куски можно растереть в ступке пестиком. Однако, при подозрении на зигомикоз ткани не гомогенизируют, т.к. хрупкий мицелий зигомицетов разрушается при этой процедуре.

Чтобы избежать риска поверхностной контаминации, материал промывают перед посевом раствором антибиотика, например, гентамици-ном (50 мг/мл).

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Лабораторные исследования включают:

-          обнаружение грибов в патологическом материале при микроскопическом исследовании нативных и окрашенных препаратов

-          выявление грибов в гистологических препаратах пораженных участков ткани

-  выделение культуры возбудителя

-  иммуносерологические реакции для выявления грибковых антигенов и антител (ИД, ИФА, РП, НРИФ, ИЭФ, РСК, РФ, РНГФ, РАЛ)

-          молекулярно-биологический метод (ПЦР)

-          определение чувствительности возбудителей к антимикотикам. При выборе метода или методов исследований и их последовательности микробиолог должен руководствоваться предварительной информацией о состоянии больного, применении лекарственных препаратов, возможных зарубежных поездках, контактах с животными, а также о месте, времени и способах забора патологического материала.

Мокрота и бронхосмы

После предварительной обработки биосубстраты микроскопируют при малом (х10) и большом (х40) увеличениях. Обнаружение в материале почкующихся дрожжеподобных клеток диаметром 4-14 мкм и псевдомицелия, характерных для грибов рода Candida, свидетельствует о наличии бронхо-легочного кандидоза. Однако, нужно учитывать возможность попадания этих грибов в мокроту из ротовой полости при сборе материала, особенно, у пациентов, получающих антибиотики широкого спектра действия. Для окончательной диагностики кандидоза важен количественный учет грибов Candida, проводимый при культуральных исследованиях.

В мокроте и бронхосмыве при микроскопическом исследовании можно отдифференцировать и другой дрожжеподобный возбудитель -Cryptococcus neoformans, который образует округлые почкующиеся клетки размером от 5 до 20 мкм в диаметре. Полисахаридная капсула возбудителя на фоне исследуемого материала в тушевом препарате проявляется как широкая неокрашенная зона вокруг клетки. Обнаружение в исследуемом материале фрагментов плесневого мицелия, конидиеносцев или конидий является этиологически значимым подтверждением инфицирования бронхо-легочной системы мицелиальными грибами. При микроскопии нативных и окрашенных препаратов можно идентифицировать Aspergillus spp. Penicillium spp. и зигомицеты. Грибы рода Aspergillus в патологическом материале представлены характерными септированны-ми бесцветными дихотомически ветвящимися гифами. В некоторых случаях также можно обнаружить конидиеносцы с шаровидными вздутиями на концах - головками.

Грибы рода Penicillium в биосубстрате выявляются редко, и отличить их от других плесневых возбудителей удается не всегда. О наличии пени-циллиоза может свидетельствовать обнаружение при микроскопии септи-рованного мицелия с интеркалярными и концевыми шаровидными образованиями или конидиеносцев с характерными «кисточками» на концах.

Зигомицеты проявляют патогенность, в основном, у иммуносупреси-рованных пациентов. Дифференциальную диагностику проводят по наличию в патологическом материале широкого (до 50 мкм) несептированно-го мицелия, образующего лентовидные структуры, которые часто перегибаются.

Цереброспинальная жидкость (ликвор)

После центрифугирования ликвора осадок микроскопируют в капле индийской туши или нигрозина для выявления неокрашенных капсул Cryptococcus neoformans и окрашивают по Граму для исследования на почкующиеся дрожжеподобные клетки Candida.

Гной