Ферменты. Строение и механизм действия. Кинетика ферментативных реакций, страница 6

Максимальная скорость Vmax отражает число оборотов фермента, если известна концентрация активных центров [Е]0, так как

Vmax = k2[Е]0. Кинетическая константа k2 называется числом оборотов.

Таблица 5

Величины k2 для различных ферментов

Фермент

Карбоангидраза

Ацетилхолинэстераза

Химотрипсин

ДНК-полимераза I

Число оборотов/cек

600 000

25 000

1000

15

Число оборотов фермента - это то количество молекул субстрата, которое превращается в продукт реакции в единицу времени при полном насыщении фермента субстратом. Другими словами, это мера эффективности работы фермента. Самым активным   из   известных  ферментов   является   карбоангидраза

(табл. 5).

Методы определения величин КМ и Vmax. Кинетические константы односубстратной реакции определяют путем измерения скорости реакции при различных концентрациях субстрата (S). Наиболее удобный способ для их расчета - это линеаризация уравнения Михаэлиса–Ментен, графические методы определения константы КМ и Vmax. Ниже представлены графики Лайнуивера-Берка и Иди-Хофсти.


Ниже представлен график Лайнуивера–Берка.

1 / [S]

 
 


Статистический анализ показал, что метод Иди–Хофсти дает более точные результаты, чем метод Лайнуивера–Берка, так как в первом случае и зависимые, и независимые переменные входят в величины, откладываемые на обеих осях координат. Очень точный графический метод - «прямой график» Эйзенталя-Корниш-Боудена. Координаты экспериментальных точек откладывают на осях, затем через каждую пару точек проводят прямую. Полученные прямые пересекаются в точке {KM;Vmax}.

Далее приведен график Иди–Хофсти.


 

 


Ниже представлен график Эйзенталя–Корниш-Боудена.

 


Ингибирование и активация ферментов. Эффекторы - соединения, специфично влияющие на скорость ферментативных реакций. Одни из них ускоряют процесс и называются активаторами, другие замедляют и носят название ингибиторов ферментов. По принципу действия ингибиторы делят на обратимые и необратимые.

Обратимое ингибирование. Конкурентный ингибитор структурно подобен субстрату и потому связывается в активном центре фермента, вследствие чего препятствует связыванию субстрата в том же центре (см. ниже рисунок). Конкурентный ингибитор уменьшает скорость реакции, снижая долю молекул фермента, связавших субстрат. Неконкурентный ингибитор и субстрат могут связываться молекулой фермента одновременно, т. е. участки их связывания не перекрываются. Неконкурентный ингибитор уменьшает число оборотов фермента, а не снижает долю связавших субстрат молекул фермента.

Конкурентное и неконкурентное ингибирование различаются по кинетике.

Далее приведена схема конкурентного ингибирования.

Отличительной особенностью конкурентного ингибирования является способность субстрата при достаточно высокой концентрации (~ 5–10 Км) предотвращать ингибирование, другими словами, защищать фермент.

Ниже представлены графики:

Лайнуивера–Берка

Подпись: + Конкурентный ингибитор

Подпись: Без ингибитора


1 / [S]

 
 


Иди–Хофсти

V / [S]

 


Далее приведена схема неконкурентного ингибирования.

Видно, что при неконкурентном ингибировании Vmax уменьшается, а КМ не изменяется, и повышение концентрации S не снимает ингибирования.

Лайнуивера–Берка

Подпись: Без ингибитораПодпись: + Неконкурентный ингибитор


Иди–Хофсти

Подпись: Без ингибитора

Подпись: + Неконкурентный ингибитор


2.3. Классы ферментативных реакций. Основные коферменты

Ферменты классифицируются как катализаторы определенных реакций, а не как индивидуальные химические соединения.

Согласно классификации Международного союза по биохимии (IUB), все ферменты разделены на шесть классов, каждый класс – на подклассы и последние, в свою очередь, на подподклассы. Каждый фермент, кроме того, имеет свой порядковый номер внутри подподкласса. Иначе говоря, фермент характеризуется классификационным номером, состоящим из букв КФ (ЕС, Enzyme Classification) и четырех чисел: номера класса, подкласса, подподкласса и порядкового номера. Существует систематическая номенклатура (IUB) ферментов и их тривиальные, общеупотребительные, названия.