Количественное определение фруктозы и пегтозы. Определение количества глюкозы в крови глюкооксидатным методом. Определение количества холестерина в сыворотке крови

Лабораторная работа 1.

Количественное определение фруктозы.

Ход работы

1.Готовится стандартный раствор фруктозы с концентрацией 100мкг/мл.

2.Из стандартного раствора готовятся 5 растворов с концентрациями 20, 30, 40, 50 и 60 мкг/мл, готовится контроль – 1 мл воды.

3.Добавляется 1 мл резорцина в каждую пробирку.

4.Добавляется 3 мл HCl (30%) в каждую пробирку.

5.Пробирки ставятся на водяную баню 80^оС на 8 минут.

6.После охлаждения пробы фотометрируются на 440 нм против контроля в 10мм кюветах,

Строится калибровочный график.

7.Задача разводится в 10, 5 и 2 раза исходя из конечного объема пробы 1 мл, и повторяют процедуры 3-6. Находится содержание фруктозы.

Лабораторная работа 2.

Количественное определение  пегтозы.

Ход работы

1.Готовится стандартный раствор ксилозы с концентрацией 200 мкг/мл.

2.Из стандартного раствора готовятся 5 растворов с концентрациями 40, 80, 120, 160 и 200 мкг/мл, готовится контроль – 2 мл воды.

3.Добавляется 2 мл расвора орцина в HCl в каждую пробирку.

4.Пробирки ставятся на водяную баню 100^оС на 20 минут.

5.После охлаждения пробы фотометрируются на 590 нм против контроля в 3 мм кюветах,

Строится калибровочный график.

7.Задача разводится в 10, 5 и 2 раза исходя из конечного объема пробы 2 мл, и повторяют процедуры 3-5. Из калибровочного графикан содержание ксилозы.

Лабораторная работа 3

Определение  количества глюкозы в крови глюкооксидатным методом.

Ход работы.

1.Собирают кровь, смештвают с депротеинизирующим раствором (5мл на 0,5 мл крови.)

2.Центрифугирут на 2000 об/мин.

3.Готовится глюкоза с концентрацией 12 ммоль/л, из неё готовятся растворы с концентрациями 3, 6, 9.

4. 3 мл фермента помещается в 37^оС на 5 мин, затем добавляется 0,3 мл раствора глюкозы или плазмы крови, выдерживается 25 минут при 37^оС.

5.Пробы фотометрируются в 3мм кюветах на 490 мм, строится калибровочный график.

7.По калибровочному графику находится содержание глюкозы в крови (5,7 ммоль/л)

Лабораторная работа 4

Количественное определение неорганического фосфата.

Ход работы

1.Готовятся растворы с содержанием неорганического фосфата 0, 15, 25, 50, 75, 100 нмолей в пробе.

2.В каждую пробирку добавляется 0,03 мл раствора тритона Х100.

3.С интервалом 3 мин. в пробирки последовательно добавляется 0,3 мл молибдата аммония и перемешивается.

4.Через 20 мин. определяется мутность в 1-ой пробирке, 23-во второй и т.д. в кювете 3мм против воздуха на 660нм.

5.Стороится калибровочный график.

6. Задачу разбавляют до объёма 2,7 мл, и проделывают с ней пункты 2-4. Содержание находится по графику.(             )

Использование неорганического фосфата в процессе брожения.

Ход работы.

1. Готовятся 4 пробирки с 1 мл ТХУ(10%), помещается на ледяную баню..
2. В химическом стакане растворяется 1 г глюкозы в 5мл фосфатной смеси, добавляется 200 мг дрожжей. Перемешивается. Тут же отбирается 1мл смеси и переносится в 1 пробирку с ТХУ. Оставшаяся смесь помещается в водяную баню(37^оС).
3. Через 20, 40, 60 мин. отбираются пробы 1 мл смеси и переносятся в пробирки с ТХУ.
4. 4. В каждой пробе белок отделяется центрифугированием 3000об/мин.
5. Из каждой пробирки забирается 0,5 мл супернатанта и добавляется 2.2 мл воды.
6.  Проделываются пункты 2-4 из предыдущей задачи. Строится график.

Лабораторная работа 5.

Определение количества холестерина всыворотке крови.

Ход работы

1. 2 пробирки по 3 мл ферментативного реагента помещаются в термостат на 5 минут (37^оС)
2. Добавляется 0,3 мл сыворотки/H2O/станд. Р-р холестерина и выдерживается 25 минут.
3. Фотометрируется в кювете 3 мм.

4. Концентрация в сыворотке 6,5 мл.

Определение мочевины в сыворотке крови.

Ход работы.

1.Готовится раствор мочевины с концентрацией 10 ммоль/л, из него 2, 4, 6, 9 ммоль/л.

2.Добавляется 0,5 мл реагента 1 и греют в термостате 5 минут (37^оС).

3.Последовательно добавляются реагенты 2 и 3 по 2 мл, и держится в термостате 5 минут (37^оС).

4. Фотометрируют на 670 нм.

Концертация холестерина 8,2ммоль/л.

Лабораторная работа 6.

Определение содержания ДНК по цветной реакции на дезоксирибозу.

Ход работы.

1. Готовятся растворы с концентрациями ДНК: 0, 30, 75, 150, 225, 300 мкг.мл. в 1 мл, и 2 мл кислотного гидролизата ткани
2. Прибавляется реактив Дише 4 мл.
3. Смеси помещаются в кипящую баню на 10 минут
4. После охлаждения фотометрируется на 600 нм, строится калибровочный график.

Содержание ДНК в печени крысы рассчитывается исходя из графика (концентрация с учетом разбавления 145мкг/мл, или 146 мг/г печени из пробы массой 0,098 г.