Вирус гепатита В и новые вакцины для победы над ним, страница 4

Вирус также может трансформиро­вать клетку-хозяина в результате ин­теграции вирусной ДНК в хромосом­ную ДНК клетки. Внедрение вирус­ных последовательностей около кле­точных онкогенов может нарушать экспрессию последних и быть причи­ной бесконтрольного роста. Это ти­пично для ряда ретровирусов, вызы­вающих лейкозы и карциномы у мле­копитающих и птиц после некоторого латентного периода. Хотя в процессе жизненного цикла HBV обычно его генетический материал не включается в геном хозяина, такие интегрирован­ные формы могут случайно образо­вываться.К. Брешо, который работал одно время в нашей лаборатории, Д. Ша-фриц из Медицинского колледжа им. Альберта Эйнштейна и В. Раттер из Калифорнийского университета в Сан-Франциско анализировали ДНК из гепатом и обнаружили вирусные последовательности, интегрирован­ные в хромосомы опухолевых клеток. Такие последовательности наблюда­лись в основном в опухолях у хрониче­ских носителей HBsAg, но встре­чались и у пациентов, не имевших HBsAg. Интегрированная вирусная ДНК также иногда обнаруживается в печени у хронических носителей HBV, а это свидетельствует о том, что инте­грация может происходить до или на ранней стадии формирования опухоли.

АНАЛИЗ опухолей и клеточных ли­ний показал, что ДНК HBV мо­жет включаться в клеточные хромо­сомы во многих разных местах. Это часто индуцирует различные генети­ческие перестройки, такие, как делеции, транслокации и амплификации; подобные аномалии — общее явление для раковых заболеваний человека. Последствия этих генетических собы­тий пока не вполне ясны.

В одном случае ранней гепатомы человека А. Дежан из нашей лаборатории обнаружила инсерцию ДНК НВ V в ген из семейства генов, кодиру­ющих рецепторы стероидных гормо­нов и гормонов щитовидной железы. Этот ген удалось выделить, и оказа­лось, что его продуктом является ре­цептор ретиноевой кислоты. Ретино-евая кислота сильно влияет на диффе-ренцировку и пролиферацию клеток; с ее избытком на ранних стадиях бере­менности связаны некоторые врож­денные дефекты. В культуре клеток это вещество может возвращать не­которые аномальные клетки в нор­мальное состояние, что используется при лечении лейкозов. Возможно, что мутация гена рецептора ретиноевой кислоты при интеграции в него ДНК HBV играет роль в генезисе гепатомы у человека.

В другом случае гепатомы человека Брешо (в настоящее время сотрудник Больницы Некер в Париже) обнару­жил сходную интеграцию ДНК HBV в ген, кодирующий циклин А. Этот белок участвует в клеточном росте, и при ненормальной экспрессии его гена может нарушаться регуляция проли­ферации клеток. О частоте таких ви­русных инсерций в клеточный геном хотелось бы знать больше.

Мы получили дополнительную ин­формацию о роли интеграции вирус­ной ДНК в развитии гепатомы, изу­чая опухоли лесных сурков, индуциро­ванные видоспецифичным вирусом гепатита. В этих опухолях вирусная ДНК всегда включается в клеточный геном, причем в 30% случаев местом интеграции являются два гена из се­мейства клеточных онкогенов туе. В норме эти гены участвуют в регуля­ции клеточного роста и дифференци-ровки, но могут также иметь отноше­ние к развитию лимфоидных опухо­лей и различных карцином. Часть ви­русного генома, содержащая энхан-сер, внедряется около онкогена туе, не модифицируя сам ген. При этом синтезируются нормальные белки Мус, но их образование управляется вирусной генетической информацией, а не клеточными механизмами. В ре­зультате клетка производит белки Мус в избытке, что ведет к бесконт­рольному клеточному росту. В при­нципе здесь действует тот же меха­низм, что и при ретровирусной индук­ции лимфоидных опухолей у грызу­нов и птиц.

Пока нет никаких указаний на то, что развитие гепатомы у человека имеет сходный механизм, и интенсив­ные исследования не обнаружили вы­званных ДНК НВV инсерционных му­таций в онкогенах туе. Однако другие человеческие онкогены могут быть ак­тивированы прямо или косвенно ин-серцией ДНК HBV. П. Хофшнайдер из

Института им. Макса Планка в Мюн­хене показал, что интегрированная ДНК HBV определяет синтез модифи­цированных белков, которые стиму­лируют экспрессию вирусных и кле-точчых генов, в том числе мощных он­когенов. О непрямом действии вируса сообщил Ф. Чизари из научно-исследо­вательского института Скриппсовской клиники: у трансгенных мышей сверх­производство большого белка оболоч­ки HBV ведет к хроническому пораже­нию клеток печени и в конце концов к геп атоме.

В экспериментах с переносом ДНК К. Мацубара из Университета в Осаке продемонстрировал активацию двух-клеточных онкогенов — гена lea , свя­занного только с гепатомой, и гена hst -7, участвующего в развитии рака желудка. В гепатомах человека на­блюдались также другие генетические изменения, не так явно связанные с за­ражением HBV. Чтобы понять роль вируса в канцерогенезе на молекуляр­ном уровне, необходимы дальнейшие исследования.

ОПИСАННЫЕ выше эксперименты показывают, как технология ре-комбинантных ДНК использовалась для понимания биологии HBV. Этот подход имеет также практическое применение — в разработке диагно­стических методов и вакцин. Диагно­стические тесты для гепатита В усо­вершенствованы при помощи метода молекулярной гибридизации, осно­ванного на высоком сродстве корот­ких цепей клонированной ДНК к ком­плементарной ДНК. Клонированная меченая вирусная ДНК может слу­жить чувствительным и надежным зондом для обнаруженя инфекцион­ных вирусных частиц в сыворотке крови. В настоящее время молекуляр­ная гибридизация с использованием ДНК НВV служит обычным методом для обнаружения заражения гепати­том В. Поскольку, определив в орга­низме вирусную ДНК, можно оце­нить интенсивность репликации виру­са, этот метод также имеет значение для дальнейшего прогресса антиви­русной терапии.