Проблемы стандартизации соскобов СОПР в стоматологии с интерпретацией результатов микроскопического исследования нативного соскоба корня языка

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ Проблемы стандартизации соскобов СОПР в стоматологии с интерпретацией результатов микроскопического исследования нативного соскоба корня языка

Хабаровск, Россия Октябрь 23, 2015

Актуальность

Сбалансированная микрофлора полости рта является важной составляющей здоровья человека. Известно, что развитие специфических и неспецифических воспалительных процессов полости рта, кариеса, соматических заболеваний, включая неврологические и сердечно-сосудистые, связано с изменением качественного и количественного состава микробиома полости рта. Использование микроскопических методов исследования при заболеваниях полости рта как клинико-диагностического способа в стоматологии, ограничено. Предпочтение отдаётся культуральным методам исследования микрофлоры из патологического очага. Но недостатком микробиологического исследования является его высокая стоимость, трудоёмкость методики.

E. coli

β-гемолитический S. aureus

Некультивируемые микроорганизмы

Наличие в составе микроорганизмов полости рта трудно культивируемых и некультивируемых форм не позволяет выделять бактерии и изучать их свойства.

Известные способы микроскопического исследования

Окрашенные препараты соскоба слизистой оболочки спинки языка, для диагностики лептотрихиоза полости рта (Боровский Е. В., Чумаков А.А., Миренова Л. Г., 1987. 1. Соскоб биоматериала металлическим инструментом/шпателем, наносят на предметное стекло. 2. Высушивание на воздухе 20 минут. 3. Фиксация смесью Никифорова 20 мин. 4. Окрашивание по Романовскому-Гимзе (смесь азура и эозина) - 40 мин. 5. Промывание и высушивание - 20 мин. 6. Микроскопия с увеличением х40, затем х100.

Известные способы микроскопического исследования

Негативный способ микроскопического исследования соскоба СОПР спинки языка, других слизистых полости рта, в дерматологии для лабораторной диагностики лептотрихиоза и грибковой инфекции 1. Соскоб биоматериала металлическим инструментом/шпателем, наносят на предметное стекло. 2. Не высушивают. 3. Смешивают с каплей 10% раствора щёлочи – KOH (калиевой) или NaOH (натриевой) и накрывают покровным стеклом 4. Немедленно изучают под микроскопом с увеличением х10 и х40.

Недостатком этого метода исследования неокрашенного мазка флоры полости рта является, возможность работы не более 10 минут после смешивания с щёлочью, далее микробы в препарате разрушаются, утрачивая морфологию, искажая микроскопическую картину; для исследования доступна форма микробной клетки и количество микроорганизмов; преимущественно используется для изучения грибов, которые не разрушаются под действием щёлочи; невозможно составить представление о взаимодействии бактерий в микробиоме; невозможность дифференциации бактерий по химической структуре клеточной стенки; щёлочь разрушает эпителий, что делает невозможным исследование в соскобе эпителиальных клеток.

Цель: Предложить способ микроскопического исследования нативного соскоба со слизистой корня языка и его клинико-диагностическую интерпретацию Для внедрения в стандартную практику врача-стоматолога необходимо иметь возможность выявления 1. Количества микроорганизмов микробиома полости рта 2. Химической принадлежности клеточной стенки к грамнегативным или грампозитивным бактериям 3. Морфологии, пространственного расположения м/о 4. Коадгезии м/о между собой 5. Гистадгезии бактерий к клеткам эпителия.

Биоматериал для микроскопии: соскоб слизистой корня языка берут на границе задней и средней трети спинки (место перехода в корень языка) стерильным деревянным шпателем, с усилием надавливая на слизистую. Забранный в количестве 0,5 мл нативный биоматериал наносится шпателем поочерёдно на два сухих стерильных предметных стекла и равномерно распределяется на каждом стекле площадью около 1,5-2 см2 в пределах круга-метки, предварительно выполненной восковым карандашом по стеклу. Применяют сложную дифференциальную окраску методом Грама фиксированного мазка из глубокого соскоба корня языка, содержащего основных представителей микробиома полости рта

Метод Грама

• Препараты высушиваются на воздухе 20 мин.
• фиксируются мазками вверх в пламени спиртовки непрерывно 5-6 секунд
• окрашиваются сложным дифференциальным методом Грама:
• Метод датского бактериолога Ганса Христиана Грама включает: последовательное окрашивание фиксированного мазка карболовым генцианвиолетом, обработку раствором Люголя, обесцвечивание спиртом, промывание водой и докрашивание водно-спиртовым раствором сафранина или фуксина.