Прикладные аспекты иммунологии. Реакции иммунитета: агглютинация, преципитация

ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

кафедра микробиологии

“ УТВЕРЖДАЮ”

НАЧАЛЬНИК КАФЕДРЫ полковник медицинской службы

------------------------------

“----” ----------------------- 199--- года

ПЛАН-КОНСПЕКТ

проведения лабораторного занятия по микробиологии на ФПВ

N 5

Тема:

“ПРИКЛАДНЫЕ АСПЕКТЫ ИММУНОЛОГИИ”

Санкт-Петербург-1996 г.

Цель занятия:

- научить курсантов методам постановки и оценки реакций иммунитета: агглютинации, преципитации;

- показать их практическое значение в диагностике инфекционных заболеваний;

- раскрыть достижения отечественных исследователей в разработке и совершенствовании методик постановки данных реакций.

Учебное время - 4 часа.

I. ВВЕДЕНИЕ - 5 мин.

Реакции иммунитета применяются для диагностики инфекционных болезней, анализа антигенной структуры микроорганизмов, выявления эволюционных и генетических связей различных микроорганизмов. В основе этих реакций лежит принцип тесной физико-химической связи между антигенами и антителами, специфичности их взаимодействия. На основании этого по одному известному компоненту можно делать заключение о природе другого, т.е. природу неизвестного возбудителя можно определить по известным антигенам и наоборот.

Реакции иммунитета дают возможность судить о динамике защитных свойств организма в процессе инфекционного заболевания, степени иммунитета, возникающего в случае применения предохранительных прививок.

Сегодня на занятии будут рассмотрены две реакции: агглютинации и преципитации.

II. КОНТРОЛЬ БАЗИСНЫХ ЗНАНИЙ И ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ КУРСАНТОВ - 20 мин (письменно).

Вопросы:

1. Что такое реакция иммунитета.

2. Сущность реакции агглютинации и её практическое значение.

3. Как определить титр агглютинирующей сыворотки.

4. Сущность реакции преципитации.

5. Что такое титр преципитирующей сыворотки.

6. Как оценить титр преципитирующей сыворотки.

- специфическую (невидимую) - присоединение антигена к антителу;

- неспецифическую (видимую), когда внешнее проявление этого взаимодействия наблюдают в виде выпадения осадка, растворения клеток и других феноменов.

Необходимым условием первой фазы является соответствие (комплементарность) антител и антигенов. Детерминанта антигена должна входить в “кратер” активного центра антитела, как ключ в замочную скважину. Нередко взаимодействие на этом заканчивается, не переходя во вторую фазу. Условия реализации неспецифической фазы разнообразны: для агглютинации требуется, чтобы реакция шла в присутствии электролитов, для лизиса нужен комплемент и т.д.

Реакция агглютинации входит в группу методов, в которых реакция протекает в две фазы: первая - соединение антигена с антителом; вторая - выпадение образовавшегося комплекса антиген+антитело (агглютината) в растворе солей (электролитов).

Реакция нашла широкое применение при диагностики брюшного тифа и паратифа (реакция Видаля), бруцеллеза (Райта) и др.

Для постановки реакции агглютинации требуется:

-0,1-0,2 мл испытуемой сыворотки крови больного или соответствующей иммунной сыворотки при серологической идентификации микроба;

- соответствующие антигены или исследуемая культура;

- 0,85% р-р хлорида натрия в дистиллированной воде нейтральной реакции, который употребляется в качестве электролита;

- пипетки Пастеровские, градуированные;

- агглютинационные пробирки;

- штативы для пробирок;

- термостат и водяная баня.

Антигеном может служить взвесь живой (18-24 -часовой) культуры в изотоническом растворе или микробы, убитые формалином, спиртом или нагреванием. Антигеном может служить культура только в S-форме, которая в изотоническом растворе даёт гомогенную взвесь.  Штаммы в R-форме дают спонтанную агглютинацию.

Существуют методы постановки РА:

- пробирочный, развёрнутая реакция;

- пластинчатая - на предметном стекле.

Реакция должна обязательно сопровождаться контролем антигена и контролем сыворотки.