Медицина \ Микробиология

Прикладные аспекты иммунологии. Реакции иммунитета: агглютинация, преципитация, страница 2

Учёт результатов производят невооружённым глазом до встряхивания пробирок, а затем для более точного учёта - в агглютиноскопе при осторожном встряхивании осадка путём медленного наклона. Перед учётом пробирки выдерживают в термостате при 37о С в течении 2 ч.

При положительной реакции осадок покрывает всё дно пробирки в виде рыхлого зонтика. Осадок может состоять из легко разбивающихся хлопьев (H-агглютинация), или из зёрен (О-агглютинация), или из хлопьев и зёрен вместе. В зависимости от выражённости положительной реакции жидкость над осадком в той или другой степени просветляется. При отрицательной реакции осадок лежит плотным комком на середине дна пробирки и надосадочная жидкость сохраняет гомогенную мутность.

В контроле сыворотки не должно быть хлопьев. Контроль антигена должен сохранять исходный гомогенный вид.

На предметном стекле - пастеровской пипеткой наносят на обезжиренное предметное стекло капли сыворотки в соответствующих разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю суточной агаровой культуры или каплю взвеси микробов (диагностикума). Тщательно перемешивают. Реакция обязательно сопровождается контролем антигена и контролем сыворотки. Учёт реакции через 5-10 мин. Результат можно определять и через 30 мин если стёкла положить во влажную камеру.

3. Степень положительной реакции агглютинации обозначается плюсами: 4 плюса - полная агглютинация, очень большой осадок, полное просветление надосадочной жидкости; 3 плюса - неполная агглютинация; осадок такой же, надосадочная жидкость менее прозрачна; 2 плюса - слабая агглютинация; осадок небольшой, надосадочная жидкость непрозрачна; плюс - следы агглютинации; осадок весьма малый, надосадочная жидкость непрозрачна; минус - отрицательная реакция: осадка нет, взвесь остаётся равномерно мутной.

Титр агглютинирующей сыворотки - то наибольшее её разведение при котором наблюдается положительная реакция агглютинации при отсутствии аглютинации в контролях.

4. Реакция с молекулярными (растворимыми) антигенами носит название преципитации, макроагрегаты при этом выявляются в виде слаборазличимого осадка. Этот тест ставят в жидких средах и в агаровом геле.

Постановку реакции преципитации осуществляют двумя методами: по типу флоккуляции в виде смеси различных разведений антигена и сыворотки, или чаще, в виде реакции кольцепреципитации при наслоении на испытуемую сыворотку разведений антигена.

При первом методе смешивают цельную сыворотку с соответствующим разведением антигена, встряхивают, в термостат на 2 ч, после оставляют при комнатной температуре на 18-20 ч. При положительной реакции на дно пробирки выпадают хлопья преципитата. Реакцию учитывают невооружённым глазом или с помощью лупы.

Для постановки реакции кольцепреципитации в узкие пробирки, установленные в однорядном штативе, наливают по 0,1-0,2 мл нативной сыворотки, затем осторожно по стенке пробирки наслаивают на сыворотку тонкой пастеровской пипеткой последующие разведения антигена. Учёт после содержания пробирок в термостате 30 мин, либо час при комнатной температуре. При положительной реакции на границе двух жидкостей образуется плотное белое кольцо.

5. Преципитирующая сыворотка обычно не разводится, а её титрование производится при помощи различных разведений антигена, по этой причине определение титра преципитирующей сыворотки - это предельное разведение антигена, при котором он может быть обнаружен в реакции преципитации с неразведённой преципитирующей сывороткой. При этом образуется кольцо.

6. Титр преципитирующей сыворотки оценивается по характерному кольцу на границе двух жидкостей.

III. ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ ОСНОВА ДЕЙСТВИЯ КУРСАНТОВ - 15 мин.

Схема постановки ориентировочной реакции агглютинации:

Агглютинирующая сыворотка   Культура кишеч-   Физ.раствор

сыворотка (1:10)                            ной палочки на            1 капля

     1 капля                                        скошенном МПА

на кончике петли    

 


опыт                             контроль

- поставить ОРА на стекле согласно схеме;

- оценить результаты реакции - в случае если антиген соответствует антителам, то образуются хлопья агглютината. Если ОРА отрицательна, то капля остаётся равномерно мутной;

- занести результаты опыта в протокол.

IY. САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА КУРСАНТОВ - 20 мин.

Скачать файл