Биохимические свойства микроорганизмов. Методы идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Бактериофагия

флакон со специальной средой по индикации образующегося СO₂ с помощью  флюоресценции или колориметрически. Использование автоматических систем позволяет повысить чувствительность метода (100 клеток в 1 мл) и гарантирует отсутствие посторонней контаминации микроорганизмами (флакон не открывают в течение всего мониторинга).      Работой системы управляет компьютер. Во флакон со средой шприцем вносят исследуемый образец крови. Флакон помещают в индивидуальную ячейку инкубационного блока (в одном блоке 60 ячеек), дальнейший процесс происходит в автоматическом режиме. Флаконы инкубируются на борту аппарата при температуре 37°С, каждые 10-15 минут инкубации проводится автоматическое считывание признаков микробного роста во флаконе (по изменению цвета индикаторного диска на дне флакона). При появлении роста микроорганизмов срабатывает звуковая и световая индикация, флакон извлекают из аппарата для дальнейшей работы – выделения чистой культуры и ее идентификации.

2. Бактериологические анализаторы предназначены для идентификации и определения чувствительности  микроорганизмов

Схема выделения, индикации и идентификации бактериофага

(этапы).

1 Этап ВЫДЕЛЕНИЕ ФАГА:Фильтрация исследуемого материала через бактериальные фильтры, нагревание до 75°С и /или обработка хлороформом с целью устранения сопутствующей микрофлоры

2. Этап ИНДИКАЦИЯ ФАГА:полученный фильтрат вносят: а) в пробирку с бульонной культурой микроорганизма (например E.coli) к которому мы хотим выделить вирулентный бактериофаг; б) на чашку с МПА засеянной микроорганизмом :

3 ЭТАП ИДЕНТИФИКАЦИЯ ФАГАв исследуемом фильтрате качественными пробами по методам Фишера, Фюрта, и Отто ( «стекающая капля »).

4 ЭТАП ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ И АКТИВНОСТИ  ФАГА

Титрование это определение количественного содержания бактериофага в исследуемом материале. Для этого пользуются двумя показателями: количеством активных частиц бактериофага, содержащихся в 1 мл исследуемого материала, или величиной наибольшего разведения, при котором бактериофаг проявляет свое литическое действие. Полученную при этом величину выражают отрицательным логарифмом 10, где степень указывает разведение фага.

4.1 Определение титра активности фага в жидкой питательной среде (пробирках) по Аппельману основано на внесении различного количества титруемого бактериофага в бульон, засеянный одной и той же дозой культуры гомологичных микробов, с целью получения феномена бактериофагии.

Результат: (+) - фаголизис индикаторного штамма ; - муть -рост индикаторного штамма

Вывод: Титр активности бактериофага равен 10^-8

3.2 Определение количества фага методом агаровых слоев по Грациа

Количество бактериофагов выражают в количестве бляшкообразующих единиц на 1 мл исследуемого материала (БОЕ / мл).  Бляшки – это зоны отсутствия роста бактерий в местах нанесения фага. Для расчета содержания количества бактериофагов в 1 мл фаголизата необходимо умножить количество негативных колоний в газоне индикаторной бактериальной культуры на разведение исследуемого