Возбудители особо-опасных инфекций. Лабораторная диагностика холеры. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Лабораторная диагностика сибирской язвы

ЗАНЯТИЕ № 20 ТЕМА: ВОЗБУДИТЕЛИ ОСОБО-ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1.    Особо опасные инфекции. Таксономия и биологические свойства возбудителей. Особенности микробиологической диагностики. Противоэпидемический режим в лабораториях.

2.    Патогенные вибрионы. Таксономия. Антигенная структура. Принципы серологической классификации. Биовары. Ферментовары. Факторы патогенности. Токсины холерного вибриона, свойства. Эпидемиология, патогенез и клинические проявления холеры.

3.    Методы лабораторной диагностики холеры: бактериологическая диагностика (классическое исследование); экспресс-диагностика больных и контактировавших; методы массового обследования на носительство и обнаружение холерного вибриона во внешней среде. Серологические методы диагностики холеры. Иммунитет. Общая и специфическая профилактика и лечение холеры.

4.    Парагемолитический вибрион. Роль нехолерных вибрионов в этиологии пищевых токсикоинфекций.

5.    Бруцеллы. Таксономия. Виды бруцелл и признаки их дифференциации. Патогенность бруцелл для человека и животных. Факторы патогенности. Локализация возбудителя в организме. Методы лабораторной диагностики: а)бактериологический; б)биологический; в)серологический; г)аллергодиагностика. Особенности иммунитета при бруцеллезе. Специфическая профилактика и терапия. Антибиотикотерапия.

6.    Франциселлы. Классификация, свойства, роль в патологии человека. Возбудитель туляремии. Биологические особенности. Географические варианты. Эпидемиология, клиника и методы лабораторной диагностики туляремии. Иммунитет, специфическая профилактика и терапия заболевания.

7.    Возбудитель чумы: классификация, морфологические свойства, культуральные свойства, биохимические свойства. Возбудитель чумы: серологические свойства, факторы патогенности, резистентность во внешней среде.

8.    Чума: источник инфекции и механизм (пути) передачи, общая характеристика болезни, взаимодействие возбудителя с организмом человека. Микробиологическая диагностика чумы.

9.    Возбудитель сибирской язвы. Таксономия. Биологические свойства. Отличие от антракоидов. Факторы патогенности. Сибирская язва у человека. Микробиологические методы диагностики. Реакция термопреципитации по Асколи. Иммунопрофилактика. Препараты для химиотерапии.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ

Возбудитель Домен (царство): Procaryota , Отдел: Gracilicutes, Семейство: Vibrionaceae, род Vibrio, биовар choierae classic, серогруппа О1( в зависимостиот сочетания А-, В- и С-субъединиц О-антигена различают серовары: Огава (АВ), Инаба (АС) и Гикошима (ABC) открыты Р. Кохом в 1883 г. Биовар ETor, серогруппа О139 Bengal(агглютинируются сывороткой О139) выделенны в 1906 г. в Египте Ф. и Е. Готшлихами на карантинной станции Эль-Тор. Всего различают более 200 О серогрупп, Н-антиген является общеродовым антигеном.

Исследуемый материал: испражнения ,рвотные массы,

Учет гликозидазной активности холерного и нехолерного вибрионов на средах Гисса (триада Хейберга)

Группа	Ферментация
	Манноза	Сахароза	Арабиноза
I (холерный вибрион) Vibrio cholerae	+	+	-
II (нехолерный вибрион) Vibrio metschikovi	-	-	+

Отличие холерного вибриона от холероподобных вибрионов проводится по следующим свойствам:

1) САхароза, МАНноза, РАМноза – СА+МА+АРА-;2) Агглютинация О1 и О139 сыворотками;

3)Лизис холерным или эльтор фагами;4)наличие холерогена –энтеротоксина (ПЦР, эти штаммы не лизируют эритроциты барана).

Учет результата постановки нитрозоиндоловой пробы: Vibriocholerae образует индол на среде Клиглера, пептонной воде (ПВ + 20% H₂SO₄ →красное окрашивание).

Серовары возбудителя холеры:О1 и О139 изболее чем 200 О серогрупп, Н-  общеродовой  антиген.

Ускоренная диагностика холеры по методу Ермольевой-Полева (заполнить таблицу):

1% пептонная вода	1% пептонная вода + О1-сыворотка	1% пептонная вода + крахмал + реактив Андреде
Пленка на поверхности	Осадок (агглютинат на дне), «снег идет»	Пленка на поверхности, покраснение среды (крахмал разлагается до кислоты)

Определение биовара холерного вибриона

Признак		Биовары		Серовар О139
		Vibrio cholerae var. cholerae	Vibrio cholerae var. eltor
Лизабельность фагами:	холерный "С"	+	-	-
	"Эль-Тор 2"	-	+	-
Агглютинация куриных эритроцитов		-	+	+/-
Гемолиз бараньих эритроцитов		-	+	-
Чувствительность к полимиксину		+	-	-

Серологическая диагностика холеры

РА в серодиагностике холеры : исслед сыворотку крови ( ищут антитела), используют диагностикум -3 часовая бульонная культура. Положительным считают титр 1/40, диагностическим не менее чем ; кратное увеличение.

Разведение сыворотки	1/40	1/80	1/160	1/320	1/640	КД	КС
Результат	+ хлопья	+ хлопья	+ хлопья	+ хлопья	- муть	Муть или осадок	Прозрачная

Вывод: Обследуемый болен холерой

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА Домен: Procaryota , Отдел: Gracilicutes, Сем-во:Brucelaceaceae

Возбудители B.melitensis – от овец, B.abortus – от коров, B.suis – от свиней

Морфология грамотрицательные коккобактерии

Клинические формы____________________________________________________________________________

Исследуемый материал:________________________________________________________________________

Вакцинный штамм бруцелл  Окраска по Граму Увеличение х 630

Бактериологический метод

Питательные среды для культивирования бруцелл:  печеночный МПБ, печеночный МПА и другие специальные среды (2 посева). Инкубация одного из посевов в атмосфере с 10% СО₂ для выделения Br. abortus в течение 1-4 недель

Учет ферментативных свойств и других признаков дифференциации бруцелл на виды и биовары (заполнить таблицу):

Вид бруцелл	Потребность в СО2	Рост в присутствии		Образование Н2S	Уреаза
		фуксина 1:25000	тионина 1:50000
B.melitensis	аэробные	+	+	-	+
B.abortus	5-10% СО2	+	-	+	+
B.suis	аэробные	-	+	+	+

Серологическая диагностика бруцеллеза (с 10-12 дня болезни).1. Постановка пластинчатой реакции агглютинации Хаддлсона с концентрированным диагностикумом, окрашенным синькой:из убитых бруцелл, окрашены для лучшей видимости мелкого агглютината

Ингредиенты	Квадраты
	1-й разв. 1/50	2-й разв. 1/100	3-й разв. 1/200	4-й разв. 1/400
Сыворотка больного из пальца 2мл	0,08	0,04	0,02	0,01
Диагностикум	0,03	0,03	0,03	0,03
Результат	+ агглютинат	+ агглютинат	+ агглютинат	+ агглютинат

2. Реакции Райта в серодиагностике бруцеллеза

Разведения сыворотки	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	КД	КС
Результат	+ хлопья	+хлопья	+хлопья	+ хлопья	- муть	- муть	Муть или осадок	Прозрачная

Диагностический титр для взрослых равен 1/200; для детей - 1/100.

Вывод: титр равен 1/400, обследуемый болен бруцеллезом

3. Опсоно-фагоцитарная реакция (принцип метода)при болезни антитела –опсонины способствуют фагоцитозу Аллергодиагностика - проба Бюрне: Аллерген, сроки введения