1. Цель занятия
Ознакомить с методикой прижизненного окрашивания животных и растительных клеток и научиться отличать нормальные клетки от поврежденных.
2. Материал и оборудование для занятия
Таблицы клетки эпителия роговицы лягушки, окрашенные нейтральным красным с азуром; клетки пленки семени подсолнечника, окрашенные нейтральным красным.
Микропрепараты: поврежденные и неповрежденные клетки семени подсолнечника, окрашенные нейтральным красным; поврежденные и неповрежденные клетки эпителия роговицы лягушки, окрашенные нейтральным красным с азуром.
Влажные семена подсолнечника, 0,15%-ный раствор нейтрального красного, чашки Петри, покровные и предметные стекла. Микроскопы.
3. Методика проведения занятия
Преподаватель в течение 5—10 минут объясняет студентам цель и план проведения практического занятия, знакомит с материалом и оборудованием для работы и проверяет общую подготовку студентов к занятию (20—30 мин.).
В течение следующих 10 минут студенты изучают методическое указание по данной теме и только после этого под контролем преподавателя приступают к выполнению практической работы (70—80 мин.).
В конце занятия преподаватель подводит итог практической работы, проверяет рисунки и дает задание к следующему занятию (20—25 мин.).
1. Студенты самостоятельно готовят временные препараты семени подсолнечника, окрашивая их нейтральным красным.
Пленка семени подсолнечника является двухслойным покровом зародыша, лежащим под плодовой оболочкой семени. Техника приготовления препарата весьма проста. Предварительно замоченные или сухие семена подсолнечника освобождаются от кожуры. Затем лезвием бритвы обрезают оба конца семени и легким нажимом продольно разрезают верхний слой пленки и снимают ее пинцетом.
Снятая пленка с семени окрашивается 0,15%-ным раствором нейтрального красного в чашках Петри. В цитоплазме неповрежденных клеток образуются гранулы нейтрального красного, ядро остается бесцветным. Поврежденные клетки диффузно окрашиваются в красный цвет, ядро окрашивается более интенсивно, чем цитоплазма.
Через 20 минут из кусочка пленки готовят временный микропрепарат и изучают при большем увеличении микроскопа.
2. Изучить постоянный микропрепарат пленки семени подсолнечника с неповрежденными клетками при большом увеличении микроскопа. Препарат окрашен нейтральным красным. На препарате видны неправильной многоугольной формы клетки, заполненные гранулами нейтрального красного разной величины. На периферии клетки гранул больше, в центральной части, где находится невидимое в неповрежденной клетке ядро, их гораздо меньше. Препарат зарисовать.
3. Изучить и зарисовать постоянный микропрепарат пленки семени подсолнечника с поврежденными клетками при большом увеличении микроскопа. Препарат окрашен нейтральным красным. На препарате видны клетки неправильной формы, диффузно окрашенные нейтральным красным. Хорошо видно ядро, окрашенное более интенсивно, чем цитоплазма. Гранулы отсутствуют.
4. Изучить постоянный микропрепарат эпителия роговицы лягушки с нормальными и поврежденными клетками (демонстрация). Препарат окрашен нейтральным красным с азуром.
Поврежденные клетки имеют многоугольную форму с четко выраженными границами. Цитоплазма и ядро таких клеток окрашены в фиолетовый цвет. Ядро окрашено более интенсивно и имеет 1—2 ядрышка. Гранулы нейтрального красного и поврежденных клеток отсутствуют.
Неповрежденные клетки имеют нечеткие границы и заполнены гранулами нейтрального красного. Структура ядра и ядрышек в нормальной клетке не видна.
Зарисовать неповрежденные и поврежденные клетки.
5. Зарисовать с таблицы схему строения клетки по данным электронной микроскопии.
1. Закрепить навыки изготовления временных препаратов.
2. Освоить основы методик прижизненного окрашивания клеток.
3. Уметь отличать нормальные (интактные) клетки от поврежденных (альтерированных).
VI. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1.Что такое паранекроз и чем он характеризуется?
2. В чем сущность метода прижизненной окраски нормальных и поврежденных клеток?
3. В чем заключается метод двойного витального окрашивания?
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.